SARS-CoV核衣壳蛋白的体外表达及单克隆抗体功能鉴定          下载免费PDF全文

陈洪勋  严兴成  应建跃  吴建祥  周继勇 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2005,31(2):232-236

为对SARS N蛋白的功能进行研究,并建立快速、方便的诊断方法,将已克隆、构建成功的重组质粒PGEX-4T/N转化至E.coli BL21中,IPTG诱导表达,表达产物与兔源GST多抗在66 kD处有很强的反应性,融合蛋白GST-N分别通过GSTrap FF 1 mL纯化柱和割胶纯化两种方法获得了具有生物活性和变性的融合蛋白.其蛋白浓度分别为0.85 mg/mL和0.433 mg/mL.利用纯化的GST-N蛋白免疫SPF BALB/c小鼠,获得4株能稳定传代并分泌抗SARS N单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为3E5、6B9、4C2、4B7,经Western blot分析表明,所获得的4株抗SARS N单克隆抗体与纯化的N蛋白均具有特异反应性,且不与禽冠状病毒的N蛋白发生反应.  相似文献   

褐飞虱唾液中诱导水稻释放挥发物的活性组分研究   总被引：7，自引：0，他引：7       下载免费PDF全文

杜孟浩  严兴成  娄永根  程家安 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2005,31(3):237-244

行为生测表明在褐飞虱的头部磨碎液中存在诱导水稻释放引诱稻虱缨小蜂挥发物的活性组分,这些活性组分主要属于蛋白质类.在-15～-20℃条件下褐飞虱头部磨碎液的生物活性,至少可保持38d,但72d后全部丧失.褐飞虱唾液中存在的α-萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和β-淀粉酶等4种主要酶类中,仅β-葡萄糖苷酶所处理的稻株挥发物能明显地引诱稻虱缨小蜂.褐飞虱头部磨碎液、磨碎液中的蛋白质以及β-葡萄糖苷酶等处理稻株的挥发物与褐飞虱雌成虫为害株的挥发物对稻虱缨小蜂的引诱作用无明显差异.挥发物提取、分离与鉴定的结果表明,褐飞虱头部磨碎液、头部磨碎液中分离的蛋白质类以及β-葡萄糖苷酶等处理所诱导释放的水稻挥发物与褐飞虱雌成虫为害株所释放的挥发物组成相似.这些结果表明褐飞虱唾液中的蛋白质类,尤其是β-葡萄糖苷酶在褐飞虱诱导的水稻挥发物释放中起着重要作用.文中还就褐飞虱唾液中可能存在的各类活性组分及其可能的作用机理进行了讨论.  相似文献