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[目的]构建日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1)的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达。[方法]通过PCR方法扩增日本蟾蜍皮肤mcl-1开放阅读框,将其插入到原核表达载体pET-28b中。经菌落PCR、DNA限制性内切酶消化筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体pET-28b-mcl-1构建成功。将pET-28b-mcl-1转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE对重组蛋白的表达进行检测。[结果]原核表达载体pET-28b-mcl-1构建成功;重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。[结论]原核表达载体的构建及重组蛋白的表达,为后续MCL-1的纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定了基础。 相似文献
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为更好地利用国外引进的杏(Armeniaca vulgaris Lam.)种质资源,以北寨红杏(A.vulgaris‘Beizhaihongxing')和金太阳杏(A.vulgaris‘Goldensun')为对照,对从匈牙利引进的优质杏品系Hybrid18/79(A.vulgaris‘18/79')和Hybrid10/10(A.vulgaris‘10/10')的有效花率、自然座果率和自交座果率以及花粉管生长等特性进行研究,同时,通过S-allele-specific PCR扩增程序进行S基因型的分析测定。结果表明:Hybrid18/79、Hybrid10/10和北寨红杏的自交坐果率分别为18.05%,2.27%和1.68%,Hybrid18/79为自交亲和性品系,北寨红杏和Hybrid10/10为自交不亲和品种和品系。与自交亲和的金太阳杏相比,Hybrid10/10自花授粉后花粉管在花柱中生长受到阻塞,至花柱2/3处,花粉管顶端膨大,停止生长,而金太阳杏可以顺利进入胚囊进行受精。Hybrid18/79、Hybrid10/10和北寨红杏的S基因型分别为Su1Su2、S16S16和S30Su1,序列比对发现Hybrid18/79的2个S基因(Su1、Su2)都是新发现的S基因,北寨红杏的一个S基因(Su1)与Hybrid18/79中的一个S基因(Su1)一样,也为新发现的S基因。目前已在GenBank进行了登录,序列登录号为MF685202和MF685203。 相似文献
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