产纤维素酶菌株Trametes sp.LYW-1的分离鉴定及产酶条件分析     

关怡  尹娣  杜茜  沙艺琛  赖姗姗  赵超 《中国农业大学学报》2018,23(10):96-102

为寻找新纤维素酶和纤维素酶基因资源,以羧甲基纤维素钠作为唯一碳源,从湿润木屑中分离和筛选获得1株高产纤维素酶目的菌株LYW-1。对该菌保守序列ITS进行扩增和测序后,提交NCBI并与相近物种ITS序列进行比对和分析,基于亲缘关系构建系统发育树。将ITS rDNA保守序列比较分析结果与形态学观察结果相结合,初步鉴定该菌株属于栓菌属(Trametes)。以羧甲基纤维素钠溶液为底物,采用3’5’-二硝基水杨酸(DNS)法测定纤维素酶活力,分析pH、温度及培养基中同碳源、氮源对该菌产纤维素酶活力的影响。结果表明,菌株LYW-1在pH 7.0、37℃、淀粉为碳源和乙酸铵为氮源时为最适培养条件,总酶活力达到最大。  相似文献   

小分子伴侣GroEL（191-345）在E．coli中的表达及其培养条件的优化     

张佳艺关怡新  姚善泾 《浙江农业大学学报》2003,29(6):603-608

小分子伴侣GroEL(191-345)是分子伴侣GroEL顶端区域氨基酸残基191-345的片断，它能显提高基因工程蛋白蝎毒Cn5、亲环蛋白A和吲哚3-甘油磷酸合成酶等的复性效率，具有广阔的应用前景．为制得大量的小分子伴侣进行蛋白质复性研究，本对其培养条件进行了优化．结果表明携带小分子伴侣基因的工程茵在含有无机盐和碳源的M9培养基中培养能够显提高小分子伴侣的表达量，在确定M9为基本培养基之后，对其主要成分进行了优化；同时，考察了发酵温度、供氧量、诱导条件对表达量的影响，将发酵产量提高到556．3mg／L．  相似文献   

应用多元PCR鉴定水体中大肠杆菌的毒素基因     

关怡黄天培  潘洁茹 《中国农学通报》2010,26(16):40-43

根据已发表的大肠杆菌毒素基因序列,针对大肠杆菌的8种毒素基因设计特异引物并进行多元PCR扩增,验证多元PCR技术的可靠性及其在水环境中大肠杆菌毒素基因检测的实用性。  相似文献   

离子交换层析复性重组人γ-干扰素折叠二聚体的形成          下载免费PDF全文

靳挺  关怡新  姚善泾 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2006,32(1):101-105

SP Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用尿素梯度法进行重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性实验.结果表明,尿素梯度离子交换层析法能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,复性后的重组人γ-干扰素的纯度达95%,蛋白收率达54%,比活为7.5×105IU·mg-1.以Superdex 75凝胶作为体积排阻层析介质,对离子交换层析复性的样品进行分析,表明离子交换层析复性的样品中没有重组人γ-干扰素聚集体存在.荧光光谱分析表明重折叠的重组人γ-干扰素的构象接近于其天然二聚体构象.  相似文献   

动物园动物粪便中苏云金芽孢杆菌调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴昌标  吴莉莉  郑文金  关怡 《经济动物学报》2008,12(4)

为了寻求新的苏云金芽孢杆菌(Bt)菌株,对福建省福州市动物园和三明市动物园41种动物(其中哺乳动物33种、禽类8种)粪便中Bt进行调查。从50个粪便样品中共分离到253株芽孢杆菌,其中有15株含有晶体蛋白,确定为Bt,Bt分离率为30%。在所分离的粪便样品中,采自草食动物粪便的Bt分离率最高,达35.5%;其次是杂食动物粪便的Bt分离率为25%,肉食性动物粪便的Bt分离率最低,仅18.2%。结果表明:植物源日粮动物粪便中的Bt含量较高。  相似文献   

小分子伴侣GroEL(191-345)在E. coli中的表达及其培养条件的优化          下载免费PDF全文

张佳艺  关怡新  姚善泾 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2003,29(6):603-608

小分子伴侣GroEL(191-345)是分子伴侣GroEL顶端区域氨基酸残基191-345的片断,它能显著提高基因工程蛋白蝎毒Cn5、亲环蛋白A和吲哚3-甘油磷酸合成酶等的复性效率,具有广阔的应用前景.为制得大量的小分子伴侣进行蛋白质复性研究,本文对其培养条件进行了优化.结果表明携带小分子伴侣基因的工程菌在含有无机盐和碳源的M9培养基中培养能够显著提高小分子伴侣的表达量,在确定M9为基本培养基之后,对其主要成分进行了优化;同时,考察了发酵温度、供氧量、诱导条件对表达量的影响,将发酵产量提高到556.3 mg/L.  相似文献   

梅花鹿粪便中苏云金杆菌分离株的生物学特性及其cry基因型鉴定     

吴昌标  关怡  邱津津  黄张敏  张爱华 《经济动物学报》2009,13(2):72-76

从福州动物园采集梅花鹿粪便,采用醋酸钠-抗生素分离法分离到1株苏云金杆菌（Bacillus thuringietuis,简称Bt）MHL0702,为了解该新菌株的生物学特性,对其进行了形态学、生理生化指标研究;通过PCR—RnP鉴定体系对其cry基因型进行分析。结果表明：该菌株含有crylAa、crylBa、crylEa和crylla类基因。对3日龄小菜蛾幼虫的室内毒力测定结果显示,该菌株对重要的农业害虫小菜蛾有较高的杀虫毒力。  相似文献   

重组亲环蛋白A的可溶性表达          下载免费PDF全文

闫啸  徐立仁  关怡新  姚善泾 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2010,36(4):363-369

为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入EscherichiacoliBL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g?L-1,酵母提取物10 g?L-1,NaCl 5 g?L-1,甘露醇10 g?L-1,Amp50 mg?L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol?L-1IPTG诱导,然后在30℃、180 r?min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg?L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.  相似文献   

重组牛凝血酶原-2在大肠杆菌中的表达及包涵体的制备          下载免费PDF全文

陈建梁  关怡新  崔志芳  姚善泾 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2005,31(1):32-36

将含凝血酶原-2的质粒成功地转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导培养,获得凝血酶原-2包涵体.经对培养基成分及操作条件进行优化,详细考察了碳源、氮源、无机盐、诱导起始时间、诱导剂添加量、接种量、发酵温度和转速等因素对目标蛋白表达量的影响.在优化的条件下,重组凝血酶原-2包涵体的产量为110 mg/L发酵液,占菌体总蛋白的21.7%.  相似文献   

体外重折叠核糖核酸酶A及其荧光结构表征          下载免费PDF全文

谭培生  罗曼  盛清  关怡新  姚善泾 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2006,32(5):483-488

核糖核酸酶A(RNase A)作为蛋白质体外重折叠研究的模型蛋白,考察了稀释复性过程中脲浓度、稀释倍数、氧化还原环境(GSH浓度和GSH/GSSG比例)、pH值、温度以及聚集抑制剂的添加对该酶活性回收率的影响.在变性蛋白浓度为100 μg·mL-1,复性液含有2 mol·L-1脲,GSH浓度2 mmol·L-1,GSH/GSSG比为4:1,pH8.0,并添加终浓0.1%的PEG,转速为150 r·min-1,温度37℃的条件下复性,RNase A的活力回收率可达70%以上.利用荧光分析法对RNase A复性过程的结构变化进行了表征,在此基础上对RNase A体外重折叠过程蛋白质分子的构象变化以及活性中心的形成过程进行了阐述.  相似文献