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ERK5通路是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路家族成员之一,是一种非典型的MAPK通路,也叫做大MAPK通路(Big MAPK/BMK1),可以被各种刺激因素激活,与多种细胞反应(如细胞增殖、分化、转化及凋亡等)及机体多种生理病理过程(如脑发育、癌症及糖尿病等)密切相关.采用RNA干扰的方法,用构建的ERK5干扰质粒干扰ERK5表达,通过RT-PCR和Western-blotting的方法分别在RNA和蛋白水平上来检测ERK5的表达,鉴定干扰效率;通过G418对转染了干扰质粒的鼠恶性黑色素瘤细胞(B16F10细胞)进行稳定筛选,得到ERK5 RNA干扰的B16F10稳定细胞系,为后期的动物实验做准备.Abstract： ERK5 (extracellular-regulated kinase 5) signal pathway is a member of the MAPK family. It is an atypical MAPK signal pathway and is also named Big MAPK/BMK1. ERK5 signal pathway can be activated by various stimulating factors, and is closely associated with many kinds of cell responses, such as proliferation, differentiation, transformation and apoptosis. It is also related to the processes of physiological and pathological reactions including the development of brain, cancer and diabetes. In this study,RNAi (RNA interference) was applied to decrease the expression of ERK5. The expression of ERK5 was detected by RT-PCR and Western-blotting. B16F10 cells transformed by constructed ERK5 shRNA plasmids were stably screened using G418, and an ERK5 RNAi B16F10 stable cell line was obtained, whichwas ready for further animal experiments. 相似文献
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力生长因子(mechano-growthfactor,MGF)是新近发现的一种诱导性表达的生长因子,由IGF-1基因选择性
剪接产生,力生长因子E肽(MGF-24E)是MGF区别于其它IGF-1剪接体的特异性C端序列,其在预防组织修复
等方面有重要作用.采用Ad-Easy法成功构建MGF,MGF-24E重组腺病毒,重组腺病毒分别感染神经胶质细胞N9
和神经元细胞SH-SY5Y,MTT法检测其对两种细胞增殖的影响.结果表明,经腺病毒介导可实现MGF和MGF-
24E在神经细胞中的高表达,与对照组相比,MGF和MGF-24E在时间和浓度上对促进N9和SH-SY5Y 细胞的增
殖均有显著性效应,且二者效果相当.由此认为,MGF和MGF-24E具有促进神经损伤修复的同等作用力,为力生
长因子用于基因治疗提供更为切实的理论基础. 相似文献
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巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌(KM71/pPIC9K-MvhIL-2,本室构建)能分泌表达三突变体人白细胞介素-2(MvhIL-2),突变位点分别为125 Cys→Ala; 18leu→Met; 19leu→Ser.通过对其发酵条件的研究,探索重组人白细胞介素-2突变体工程菌KM71/pPIC9K-IL-2的生长及产物表达规律,通过3因素(即:发酵液起始pH值、甲醇诱导浓度、诱导时间)从3个不同水平上进行正交试验,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,得出摇瓶发酵表达MvhIL-2的最佳条件:发酵液初始pH 6.0,甲醇诱导浓度为0.5%,诱导72 h,最终使目的产物达到菌体总蛋白的30%以上,表达的MvhIL-2考马斯亮蓝染色条带最明显,为其进一步上发酵罐,大量生产重组人白细胞介素-2奠定了基础. 相似文献
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兔血SOD的提取及活性研究 总被引：4，自引：0，他引：4
本文报道了从兔血中提取ＳＯＤ，及连苯三酚自氧化法测其活性。结果表明，兔血ＳＯＤ粗制品活力为６０１１．２ｎｍｏｌ／Ｓ．Ｌ＾－１，比活为０．１７ｎｍｏｌ／Ｓ．Ｌ＾－１，层析纯化酶制品活力为３３０９７ｎｍｏｌ／Ｓ．Ｌ＾－１，比活为６１．２９ｎｍｏｌ／Ｓ．ｍｇ＾－１。 相似文献
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根据GenBank报道的人白细胞介素-2(hIL-2)基因分析设计并合成引物,以本室构建的pPIC9K/IL-2突变体(编码125位半胱氨酸→丙氨酸、18位亮氨酸→蛋氨酸、19位亮氨酸→丝氨酸)为模板,PCR扩增出突变型人白细胞介素-2基因.用EcoR I和BamHI对目的基因进行双酶切后,插入大肠杆菌表达载体pBV220,转化宿主菌JM109,经菌落PCR筛选阳性重组子、酶切坚定,DNA序列分析证实,重组质粒pBV220/IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放阅读框.经42℃热诱导表达,SDS-PAGE电泳显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为15 kD的外源蛋白产生,经Western印迹证明为rhIL-2.成功建立了突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因的大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础. 相似文献
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巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）工程菌（KM71/pPIC9K-MvhIL-2,本室构建）能分泌表达三突变体人白细胞介素-2（MvhIL-2）,突变位点分别为125 Cys→Ala;18leu→Met;19leu→Ser.通过对其发酵条件的研究,探索重组人白细胞介素-2突变体工程菌KM71/pPIC9K-IL-2的生长及产物表达规律,通过3因素（即：发酵液起始pH值、甲醇诱导浓度、诱导时间）从3个不同水平上进行正交试验,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,得出摇瓶发酵表达MvhIL-2的最佳条件：发酵液初始pH 6.0,甲醇诱导浓度为0.5%,诱导72 h,最终使目的产物达到菌体总蛋白的30%以上,表达的MvhIL-2考马斯亮蓝染色条带最明显,为其进一步上发酵罐,大量生产重组人白细胞介素-2奠定了基础. 相似文献
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热休克因子1(Heat shock factor 1,HSF1)作为转录调控元件,能够调控热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)的表达,保护机体免受压力损伤。为评估稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)HSF1和环境污染物五氯酚(pentachlorophenol,PCP)的关系,本研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从稀有鮈鲫肝脏中克隆HSF1全长序列,并将其命名为GrHSF1;利用Real-time PCR检测稀有鮈鲫GrHSF1的组织分布;温度以及PCP暴露下稀有鮈鲫肝脏中的GrHSF1的表达情况。RACE结果显示:GrHSF1的开放阅读框(open reading frame,ORF)长度为1581 bp,共编码527个氨基酸。系统发育树分析表明,预测得到的GrHSF1氨基酸序列与其他鱼类HSF1具有广泛的序列相似性。组织分布显示GrHSF1在稀有鮈鲫的12种组织中均表达,在肝脏中表达量最高。在肝脏中的暴露实验表明,当80μg/L≥PCP≥8μg/L时,GrHSF1的mRNA与PCP之间具有明显的剂量依赖效应,当160μg/L≥PCP≥8μg/L时,GrHSF1的mRNA与PCP之间具有明显的时间依赖效应;在过高或过低温度下,GrHSF1的mRNA均显著下降。结果表明GrHSF1是已知鱼类HSF1家族的同源基因,并可作为评估环境污染物PCP的生物标志物。 相似文献
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超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）为氧自由基清除剂，起保护组织细胞的作用。该酶的测定方法主要是根据ＳＯＤ抑制自由基（Ｏ２－）引起的反应而产生的ＳＯＤ酶活。但由于方法、条件及操作人员不同等原因，致使同一样品测得值相差很大，至今国内还未建立统一的ＳＯＤ测定方法。目... 相似文献
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