40%丁香菌酯·戊唑醇悬浮剂高效液相色谱分析     

吴景龙  袁媛  刘哲  洪德志 《农药科学与管理》2019,(1)

采用高效液相色谱法,以乙腈+水为流动相,紫外检测器,C18不锈钢柱上分离测定复配制剂中有效成分丁香菌酯和戊唑醇的含量。结果表明丁香菌酯和戊唑醇标准偏差分别为0. 03,0. 08;变异系数分别为0. 24%,0. 27%;平均回收率为99. 00%,99. 77%;线性相关系数分别为0. 998 3,0. 999 9。  相似文献   

中华鼢鼠卵透明带3基因(mZP3)真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达     

张冬辉  郑雪莉  李昊  周智敏  吴景龙  隋丹丹  韩崇选 《农业生物技术学报》2015,23(3):408-413

卵透明带3(zona pellucida 3,ZP3)蛋白是精卵结合最重要的受体。为了构建中华鼢鼠(Myospalax fontanierii)卵透明带3(mZP3)基因真核表达载体,本研究利用PCR方法得到加入酶切位点的mZP3片段,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,体外转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)和尾静脉注射昆明小鼠(Mus musculus)体内,利用RT-PCR和Western bolt技术检测其表达情况。双酶切和基因测序鉴定结果表明,所构建的表达载体是pEGFP-mZP3;倒置显微镜观察到发绿色荧光的成功转染的细胞;RT-PCR和Western bolt检测结果表明,目的基因mZP3在CHO细胞中成功表达,并且小鼠肝脏内也检测到目的基因。研究结果表明,卵透明带3基因能够在CHO真核细胞内表达,为后期基因疫苗防治中华鼢鼠提供依据。  相似文献   

草兔卵透明带3(ZP3)基因真核表达载体的构建与表达     

吴景龙  隋丹丹  张冬辉 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2015,43(11):9-16，23

【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-ZP3表达载体,并将载体转入RK-13细胞中进行ZP3表达。利用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western Bolt方法对重组ZP3蛋白表达情况进行观测。【结果】RT-PCR获得长为1 260bp的草兔ZP3基因;成功构建pEGFP-N1-ZP3重组质粒,将其转染RK-13细胞后表达出73ku的重组ZP3蛋白,RT-PCR验证和Western Bolt结果与ZP3基因的理论长度一致。【结论】首次构建了草兔ZP3基因真核表达载体并成功在真核细胞中表达重组ZP3蛋白。  相似文献   

草兔卵透明带3(ZP3)基因的克隆及序列分析     

张浩  韩崇选  郑雪莉  吴景龙  隋丹丹 《西北林学院学报》2013,28(6):63-68

根据GenBank中欧洲兔ZP3 mRNA序列设计特异性引物, 以草兔卵巢组织总RNA为模板, 通过RT-PCR技术首次克隆得到草兔ZP3 cDNA编码区,命名为hZP3( GenBank登录号:KC447289)。生物信息学分析表明:扩增出的hZP3基因编码序列长1 260 bp, 编码419个氨基酸,包含一个完整的开放阅读框(ORF)。与欧洲兔ZP3基因核苷酸一致性高达96%。预测的ZP3蛋白具有ZP家族典型特征。系统进化树显示其与欧洲兔亲缘关系最近,其次是啮齿目动物,符合物种进化规律。hZP3基因编码区的成功克隆, 为进一步利用该基因通过免疫不育手段防治森林草兔危害提供了基础。  相似文献