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【目的】构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5基因C3d-P28分子佐剂重组质粒,探明C3d-P28分子佐剂的免疫增强效果。【方法】用大肠杆菌疫苗对健康猪进行免疫激活,提取猪肝脏总RNA,RT-PCR克隆C3d-P28并连接至pUC19载体,构建pUC19-P28.n（2、4、6）串联体,然后分别将P28.n（2、4、6）连接至真核表达载体pcDNA3.1构建成 pcDNA3.1-P28.n（2、4、6）。RT-PCR扩增PRRSV GP5基因,分别定向克隆至pcDNA3.1-P28.n（2、4、6）中,构建pcDNA3.1-GP5-P28.n（2、4、6）重组质粒;提取重组质粒进行双酶切、电泳,同时用重组质粒转染Marc 145细胞,经间接免疫荧光进行蛋白表达检测,并用重组质粒免疫小鼠,通过ELISA试剂盒检测小鼠体内抗体、IL-4和IFN-γ的水平,检验重组质粒的免疫效果。【结果】从猪肝脏中克隆了C3d cDNA,构建了pcDNA3.1-P28.n（2、4、6）串联体,并将PRRSV GP5基因定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-P28.n（2、4、6）中,构建了PRRSV GP5重组质粒（pcDNA3.1-GP5-P28.2、pcDNA3.1-GP5-P28.4、pcDNA3.1-GP5-P28.6）;通过检测小鼠血清中抗体、IL-4和IFN-γ的结果显示,抗体效价、IL-4和IFN-γ含量均比对照组高,且以pcDNA3.1-GP5-P28.6组的效果最好,与空白对照及PCDNA3.1-GP5组比较差异均显著（P<0.05）。【结论】构建了猪补体C3d-P28分子佐剂PRRSV GP5重组质粒,该质粒可刺激机体产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,补体 C3d-P28分子佐剂能显著增强PRRSV GP5基因的免疫效果。 相似文献
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为了比较猪、鼠、鸭C3d基因的不同,以便为下一步研究不同动物C3d作为分子佐剂核酸疫苗的效果,试验对3种基因进行克隆和序列分析。首先提取猪、鼠、鸭的肝脏总RNA,以RNA为模板,通过RT-PCR方法,分别扩增C3d分子的cDNA,再将3种动物的cDNA分别克隆到pMDl8-T载体中,然后转化BL21大肠杆菌,经酶切鉴定后进行序列测定,根据测序结果利用生物信息学工具软件对3种C3d进行生物学性质分析。结果发现,猪与鼠和鸭的C3d基因的同源性分别为81.9%和65.6%,鼠与鸭C3d基因的同源性为65.8%;鼠、猪的补体C3d分子与受体CR2结合的功能区有28个氨基酸,鸭有29个氨基酸。 相似文献
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为了解笼养肉鸡舍整个养殖周期空气中细菌群落组成及病原菌菌属特征,采用FA-3型气溶胶粒度分布采样器,对山东省潍坊市昌邑(X)和安丘(A)2个养殖场空舍期消毒前,消毒后,鸡日龄在7、14、21、28、35 d时舍内空气中细菌进行了采集,应用Illumina HiSeq高通量测序技术测定细菌16S rDNA的V3-V4区序列,分析养殖周期不同时期样本的细菌群落组成。结果表明,所有样本在97%相似度水平下共产生1494个有效操作分类单元(operational taxonomic units,OUT)OUT,涵盖了34门、75纲、102目、147科、220属、75种的细菌;笼养肉鸡舍空舍期消毒和带鸡消毒有一定作用效果,合理通风与笼养肉鸡舍舍内细菌种类的减少有密切关系。通过对空气样本菌群中丰度较高的病原菌属统计,以期为笼养肉鸡场的消毒、用药和笼养肉鸡场生物安全体系的制定提供理论依据。 相似文献
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正当前在养鸭生产过程中,由于生物安全保障措施弱、饲养管理不到位等原因,鸭病仍然是养殖生产的重大威胁,其中大肠杆菌病是影响养鸭业的一种重要疾病,给养鸭户造成了较大损失。鸭大肠杆菌病又名鸭大肠杆菌败血病,是一种急性败血性传染病,本病目前呈世界性分布,国内各地的鸭群普遍存在感染并常有发病。主要表现为发病突然,患鸭精神沉郁,不喜动,食欲不佳,嗜睡,眼部常有分泌物,有时有腹泻等症状。主要侵害2～6周龄的雏鸭其中以雏鸭或小鸭的败血症和产蛋 相似文献
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根据沙门菌invH基因序列设计1对引物,对9株沙门菌和4株常见病原菌进行PCR扩增,并将扩增出的in-vH基因进行克隆及序列分析,应用生物信息学方法预测invH蛋白的T细胞抗原表位。结果表明,9株沙门菌PCR均扩增出519bp的特异条带,4株非沙门菌均无特异带扩增;核苷酸序列分析证实,3株鼠伤寒沙门菌之间同源性为99.8%,与鸡白痢和鸡肠炎沙门菌之间的核苷酸序列同源性为98.6%,3株猪伤寒沙门菌和3株鸡源性沙门菌同源性较低,且不在同一支系统进化树上;invH蛋白有5个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位。 相似文献
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为深入了解牛MBL-C蛋白的结构功能特点、作用机制及其结构基础，以中国荷斯坦牛的MBL-C蛋白序列为研究对象，使用多种软件工具对其进行生物信息学分析。结果表明，中国荷斯坦牛MBL-C蛋白由249aa构成，不稳定指数29.71，脂肪系数68.19，亲水性氨基酸占68.46%，疏水性氨基酸占31.54%，总平均亲水性-0.403，为亲水性稳定蛋白。含Sec/SPⅠ常规信号肽，无跨膜结构域，主要定位于胞外，为经典分泌蛋白。预测到23个磷酸化位点及其对应激酶，未预测到N-糖基化位点和O-糖基化位点。分别有27.71%、4.82%、51.41%、16.06%的氨基酸参与形成α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链，获得了可信度和质量较高的三聚体三维立体结构模型。本研究可为牛MBL-C蛋白结构与功能、作用机制阐释乃至牛抗性遗传、分子育种等深入研究提供参考。 相似文献
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从2018年农业农村部兽用抗菌药使用减量化试点行动开始到目前全国各省市区的全面实施推广，兽用抗菌药物减量化使用取得了明显效果，但目前仍有兽用抗菌药物过量使用事件的发生。《2020年中国兽用抗菌药使用情况报告》指出，2020年，中国境内使用的全部抗菌药总量为32 776.298 t，动物产品兽用抗菌药使用量约为165 g/t，仍高于发达国家标准，兽用抗菌药使用减量化行动仍有很长的路要走。本文对抗菌药物过量使用的危害与原因进行了分析，阐述了我国抗菌药物使用现状，提出了多种减量化模式，以期为“兽用抗菌药使用减量化试点行动”提供可行性参考。 相似文献
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