SUMO-cFGF-21发酵工艺优化及其降糖效果研究     

任桂萍  王耀群  姜兴昊  刘世杰  李德山 《东北农业大学学报》2019,50(4):54-62

研究旨在优化SUMO-cFGF-21发酵工艺,同时检测cFGF-21蛋白对糖尿病小鼠和犬血糖的降糖效果。通过SDS-PAGE电泳分析发酵条件(菌种、工程菌OD600、诱导时间、诱导温度、诱导剂IPTG浓度)对SUMOcFGF-21蛋白表达的影响。结果表明,22号菌种蛋白表达量最高,达到上清蛋白30.5%,可作为一级菌种。发酵过程中,当工程菌OD600值约为2、诱导时间6 h、诱导温度23℃、诱导剂IPTG终浓度1 mmol·L~(-1)时,上清中SUMOcFGF-21蛋白表达量最高,达到上清蛋白19.7%。经Ni柱亲和层析,酶切去掉SUMO标签后成功制备cFGF-21蛋白。将不同剂量cFGF-21持续注射糖尿病小鼠两周,以有效剂量cFGF-21持续注射糖尿病犬两周,观察降糖效果。结果表明,与模型对照组相比,有效剂量cFGF-21均可极显著降低糖尿病小鼠和犬的血糖(P0.01)。研究成功优化SUMO-cFGF-21蛋白中试发酵工艺,并检测cFGF-21蛋白对糖尿病小鼠和犬血糖的降糖效果,为临床应用cFGF-21治疗犬糖尿病提供依据。  相似文献   

不同维持剂量聚乙二醇修饰的FGF-21在Ⅰ型糖尿病小鼠中降糖作用的研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

李德山  姜兴昊  徐鹏飞  郑琦  贺奇  王耀群  任桂萍 《东北农业大学学报》2017,48(2)

成纤维细胞生长因子21(FGF-21)是一种具有调节血糖功能的蛋白,且FGF-21聚乙二醇化可增加其半衰期、降低其免疫原性,有望成为临床治疗糖尿病新药。为推进聚乙二醇化FGF-21(pFGF-21)临床应用,在I型糖尿病小鼠模型上探索使用剂量。研究以1 mg·kg~(-1)pFGF-21作为启动剂量治疗小鼠15 d;后降低治疗剂量,分别以0.25、0.5 mg·kg~(-1)pFGF-21作为维持剂量持续治疗30 d。试验期间检测小鼠血糖、口服葡萄糖耐受量(OGTT)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血清功能及肝脏糖代谢相关基因mRNA表达水平。结果发现,试验方法对Ⅰ型糖尿病治疗效果显著;此外,通过生化指标对比显示经pFGF-21治疗后,可显著改善肝脏功能和脂代谢紊乱(P0.01)。结果证明,1 mg·kg~(-1)pFGF-21启动后,以0.25和0.5 mg·kg~(-1)作为维持剂量,即高剂量启动,低剂量维持,治疗效果良好,对pFGF-21临床应用具有重要意义。  相似文献