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以霉菌几丁质合酶Ⅲ保守序列作为靶序列设计引物,合成分子信标探针;以黑曲霉菌ATCC(16404)DNA为模板,通过PCR、分子克隆、转录构建靶标RNA,进而建立实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT),并对体系内相应成分进行优化;最后利用优化的SAT体系检测食品污染中常见的病原微生物,评价SAT方法的特异性;针对不同浓度的黑曲霉菌孢子悬液,提取RNA进行SAT检测,评价SAT方法的灵敏性。结果表明,SAT检测体系中引物浓度为10μmol·L~(-1)及探针浓度为10μmol·L~(-1)时,反应曲线最佳;扩增过程中累计荧光量达到设定的荧光阈值所需循环数与培养的黑曲霉菌孢子量的对数存在线性相关关系(y=-7.061x+59.567,R~2=0.961 1),该方法的灵敏度为10~3个·mL~(-1)孢子,用该方法检测食品中常见污染菌,发现仅黑曲霉菌出现荧光信号。初步建立了黑曲霉菌的SAT检测体系,可与食品常见污染细菌相鉴别,特异性达100%,进一步提高灵敏度后,可成为食品中黑曲霉菌检测的新方法。 相似文献
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真菌广泛存在于空气、水、各种动植物体和有机体中,在生长过程中产生容易引起人和动物生理变化和病理变化的次级代谢产物,导致人类和动物的急性或慢性中毒。因此,快速准确地检测食品中污染真菌已成为保障食品安全和预防疾病的重要环节。污染食品的真菌主要是霉菌和酵母菌,对其检测方法有多种,但不同检测方法各有其优势和不足以及不同的应用范围,就近年来食源性霉菌和酵母菌检验方法作一简要概述。 相似文献
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