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[目的]对牛冠状病毒N蛋白进行原核表达,利用指数富集的配基系统进化技术筛选N蛋白的核酸适配体,为该病诊断方法的建立奠定基础.[方法]根据牛冠状病毒基因序列,设计N蛋白编码基因特异性引物,扩增目的基因并通过酶切、连接、转化构建原核表达载体pET-28a-N,优化N蛋白表达条件,镍柱纯化获得高纯度高浓度的N蛋白.利用微孔板法,经过包被、封闭、加文库、洗脱、提取、PCR、胶回收和反筛等步骤从原始核酸适配体文库中筛选出N蛋白特异性适配体,连接T载体转入DH5a感受态细胞后,经菌落PCR鉴定和测序获得与N蛋白特异性结合的适配体序列,测定其结合常数,并利用在线软件预测其二级结构.[结果]成功表达出约55 kD的重组蛋白;经微孔板法筛选出67条适配体序列,其中N-12、N-33和N-45出现多次重复,经测定3条核酸适配体均具有环状、发卡结构,利于与目标蛋白稳定结合.[结论]筛选的3条核酸适配体有望用于牛冠状病毒病早期诊断用酶联适配体方法的建立. 相似文献
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为深入了解我国运用土壤微生物措施改良土壤的研究领域发展概况,同时为该领域的科研提供数据参考,利用CNKI数据库,采用文献计量学的方法,通过分析比对年度发文量趋势、主要发文机构、高被引文章和主要关键词,了解研究状况.结果表明:我国运用土壤微生物改良土壤的研究呈逐年增加趋势;主要研究机构集中在农业类大学中,以河南农业大学研究质量较高;土壤改良剂、生物炭等微生物措施是该方面研究的热点. 相似文献
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气候变化对生态系统造成了严重的影响,包括破坏了生态系统的稳定性、影响了生态系统的生物多样性等。环境变化对植物功能性状有明显的影响,气候变化会指示植物功能性状的改变趋势。识别植物功能性状对气候变化的影响机理是当前的研究热点。基于此,通过研究相关文献,针对植物功能性状中叶片功能性状、根性状之间的关系进行深入研究。 相似文献
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凸缘台阶零件的成形模具所涉及的工艺过程,解决了大尺寸、多台阶零件拉伸变形量大、材料流入不足而产生撕裂的问题.该方法结构灵活可靠,并能保证产品质量. 相似文献
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桑葚是木本植物桑树的果穗，是被国家卫生部门认定为“药食同源”的优质农产品，被誉为“中华果皇”“民间圣果”。目前，我国桑葚主要采用化学方法进行杀虫处理以及病虫害防治，但由于使用不当，导致桑树果实中的化学农药残留量增加，严重影响了人体健康和产业经济发展。文章重点探讨了桑葚中农药残留的测定方法和生物降解方法，以期对桑葚中农药残留的处理起到一定借鉴作用。 相似文献
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为探明关中农户型“猪-沼-粮”循环模式的能流特征、调控途径、效益状况,以及是否适合在关中区域推广问题,应用能流理论与系统分析法,对该循环系统进行能量投入和产出、能流去向、能流循环指数以及效益分析。结果表明：关中农户型“猪-沼-粮”循环模式是一个以生猪养殖业为主,秸秆还田种植业和沼气工程为辅的环境友好型农业生产模式。该系统以有机能投入为主,农作物光能利用率为1.19%,能流循环指数0.92,具有较高的自我稳定性和自我维持能力,机械化程度较高,农户每年增加7149.78元的经济收入,同时兼具良好的生态和社会效益。但种植子系统复种指数低,沼气工程的科技投入低,致使整个模式的产投比不高。该循环模式适合在关中地区大力推广,同时应采取因地制宜的系统结构调整和优化原则,坚持完善农业技术指导部门的发展策略。 相似文献