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试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn~121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。 相似文献
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为了方便临床上鉴定羊消化道常见且易混淆线虫虫卵并丰富相关资料,试验从羊消化道中采集疑似捻转血矛线虫、夏伯特线虫、食道口线虫和奥斯特线虫共4种线虫,采用形态学和分子生物学方法鉴定虫种,将4种线虫于体外短暂培养后得到纯种虫卵,通过观察虫卵不同发育阶段的胚胎形态变化获取每种线虫虫卵形态特征,并对虫卵的长径、宽径和长宽比进行测定。结果表明:经鉴定4种线虫分别为捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫、粗纹食道口线虫和普通奥斯特线虫。4种线虫虫卵初期胚胎多呈收缩状态且形似桑葚,在外观形态上具有相似性,均为双层卵壳,多数对称,少数不对称。捻转血矛线虫虫卵呈短椭圆形,颜色较浅;绵羊夏伯特线虫虫卵呈椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深;粗纹食道口线虫虫卵呈长椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深,与绵羊夏伯特线虫虫卵相近;普通奥斯特线虫虫卵亦呈长椭圆形,颜色与捻转血矛线虫相近,较绵羊夏伯特线虫和粗纹食道口线虫虫卵浅。虫卵在生理盐水中培养1~6 d后,捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫和普通奥斯特线虫依次进入蝌蚪期和幼虫期,但仅凭肉眼依然难以区分虫卵种类;绵羊食道口线虫未观察到含蝌蚪或含幼虫的虫卵,仅在桑葚期观察到胚胎收缩成1团及... 相似文献
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本研究旨在了解近年来我国四川、贵州地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子流行病学及遗传变异情况,对该地区2016—2018年间采集的8份PRRSV阳性样品进行病毒分离鉴定和全基因组测序,进一步使用RDP4和Simplot生物软件对全基因序列进行重组分析。结果显示,8个PRRSV毒株全基组全长为15 010~15 321 nt,毒株间相似性为80.9%~91.7%。NSP2氨基酸分析结果显示,4个毒株表现出与HP-PRRSV毒株一致的30 aa缺失,另外4株表现出与NADC30毒株一致的131 aa缺失。其中,GZgy17表现为“1+19+29 aa”新型缺失模式。ORF5氨基酸分析显示,3个毒株在33位点出现新型的1 aa缺失。遗传重组分析显示,8个毒株表现出PRRSV-2毒株6种不同谱系(Lineage)间的重组方式,分别如下:1) SCnj16:L8+L1;2) SCxyz17:L1+L5;3) SCya18:L1+L3;4) GZgy17:L8+L3;5) SCcd17和SCN17:L1+L8+L5;6) SCcd16和SCya17:L1+L8+L3。本研究结果表明,我国四川、贵州地区不仅有多种谱系PRRSV毒株并存,其基因组还出现了复杂的遗传重组现象,具有上述复杂基因组的PRRSV毒株在我国的流行状况值得高度关注。 相似文献
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猪腹泻病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来进行治疗,但易产生副作用。寻找中药来替代抗生素治疗猪腹泻病,是生猪养殖业发展的大方向和迫切需求。研究将中药余甘子、诃子用中性去离子水索氏提取4~6 h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6 h,蒸干溶剂,收率分别为10.5%、10%、11%和10%。将余甘子、诃子用水稀释,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80水溶液稀释得到试验用药物贮存液,采用试管法测定余甘子及它与其他中药的组合对猪腹泻病原菌(大肠杆菌,猪霍乱沙门氏菌,以及这2种细菌混合菌)的最低抑菌浓度,结果显示:余甘子对猪腹泻病原菌有较强的抑菌作用。诃子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与余甘子的多种药物组合也有较强的抑菌作用,多数能协同余甘子抑制猪腹泻常见病原菌。 相似文献
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胶体金技术是一种常见的标记技术,胶体金免疫层析试纸条因具有简便、快速、廉价、易操作、安全、稳定、不需特殊仪器、肉眼即可判断等优点,在动物疫病检测,特别是基层兽医人员以及大批量检测和大面积普查等方面得到了广泛应用,显示出了巨大的发展潜力和广阔的应用前景。本文就胶体金试纸条在猪病快速诊断上的应用现状及发展前景作一简要综述,为我国猪病毒病的诊断与预防控制提供参考,同时对胶体金技术与几种常见检测技术的性能进行了比较,剖析了胶体金技术的优势及发展瓶颈,并对其发展方向进行了展望。 相似文献
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为评价市售的15种消毒剂的消毒效果,采用悬液定量杀菌试验对15种消毒剂的杀灭能力进行实验室评价,从中选择最有效的3种进行喷雾消毒,检测其杀菌率。结果:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫均能够在10 min内100%的杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,而作用10 min对枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的杀灭率分别能达到82.9%,56.8%和59.3%,喷雾消毒后30 min和48 h的杀菌率分别为81.5%,65.1%,80.9%和54.2%,43.5%,55.2%。表明:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫的杀灭能力最强,现场消毒后以百胜-30和百毒杀S的杀菌和持续的效果最好。 相似文献
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为进一步了解藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV) JXA1分离株具有不同易感性的分子机理,本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法比较分析藏猪、藏梅猪和大约克夏猪感染JXA1分离株前、感染后4、7和14 d肺脏中HSPG2、SIGLEC1、CD163、VIM和NMMHC-ⅡA 5个PRRSV受体基因的差异表达情况。结果显示,藏猪感染JXA1分离株后4和14 d肺脏中HSPG2的表达量显著高于感染前(P < 0.05),而感染后7 d HSPG2的表达量显著低于感染前(P < 0.05),藏梅猪在感染后14 d HSPG2的表达量显著高于感染后7 d(P < 0.05);藏猪感染后4和14 d肺脏中SIGLEC1的表达量显著高于感染前(P < 0.05),大约克夏猪感染后4、7和14 d SIGLEC1的表达量均显著低于感染前(P < 0.05);藏猪和藏梅猪感染后14 d肺脏中CD163的表达量均显著高于感染前(P < 0.05),大约克夏猪则感染后7和14 d均显著低于感染前(P < 0.05);藏猪感染后7 d肺脏中VIM的表达量显著高于感染前(P < 0.05),大约克夏猪在感染后7 d显著低于感染前(P < 0.05);藏梅猪感染后4 d肺脏中NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P < 0.05),大约克夏猪在感染后4和14 d NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前(P < 0.05)。结果表明,5个PRRSV受体基因中,SIGLEC1和VIM基因可能是影响藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对JXA1分离株易感性存在差异的潜在关键基因。 相似文献
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【目的】试验旨在以复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体,构建Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型(RHDV2)VP60蛋白的重组腺病毒,为RHDV2新型疫苗研究提供依据。【方法】修饰、合成带有Kozak序列的VP60基因序列,将其与腺病毒穿梭质粒进行重组,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建重组腺病毒穿梭质粒,并利用酶切与测序对重组腺病毒穿梭质粒进行鉴定;采用Ad Max腺病毒包装系统,基于HEK293细胞进行穿梭质粒与腺病毒骨架质粒的定点同源重组,构建重组腺病毒Ad5-RHDV2-VP60并感染HEK293细胞,通过RT-PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验(IFA)对重组腺病毒进行表达验证;利用Reed-Muench方法测定重组腺病毒的病毒滴度。【结果】重组腺病毒穿梭质粒酶切鉴定结果可见2条大小分别为3 895和1 752 bp的条带,测序比对结果显示,其与GenBank中公布的相应序列相似性>99%,表明穿梭质粒构建成功。RT-PCR结果可见大小约为515 bp的特异性条带;Western blotting结果显示,大小约为60 ku的VP60... 相似文献