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【背景】副结核病(paratuberculosis,PTB)是由副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis,MAP)主要引起反刍动物的一种慢性消耗性传染病。患病动物表现为肉芽肿性肠炎和肠道的功能失调、顽固性腹泻、渐进性消瘦、营养不良、贫血、嗜睡甚至死亡。PTB给畜牧业造成巨大的经济损失,并且严重威胁公共卫生安全。由于目前临床上对于PTB的检测和控制手段不够完善,现有的PTB疫苗保护效果不佳,并且干扰牛结核病的诊断,因此亟需研发免疫原性强、保护效果佳的疫苗以用于PTB的防控。【目的】通过筛选MAP免疫原蛋白,并对其免疫保护效果进行评价,为PTB的防控提供数据支持。【方法】根据MAP的p22、map1272c、map3531c、map3783、map3701c以及map3527这6个基因,分别构建5种重组质粒,在获得5种重组蛋白基础上,联合MONTANIDE ISA 61 VG佐剂皮下多点注射免疫小鼠,通过IFN-γ ELISPOT试验筛选出最佳免疫原;随后将最佳免疫原和已报道的66NC融合蛋白混合,经皮下多点注射免疫小鼠,在二免... 相似文献
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为探讨鱼类感染拟态弧菌后脾脏和肠黏膜组织蛋白差异变化,本研究以拟态弧菌04-14分离株人工感染实验动物草金鱼,利用双向电泳(2-DE)结合质谱技术对感染前后脾脏和肠黏膜组织的差异蛋白组学进行研究。结果显示,感染后脾脏和肠黏膜组织中分别有11个和12个显著差异表达蛋白点,经MALDI-TOF-MS质谱鉴定出19种显著差异表达蛋白,其中上调表达蛋白10种,下调表达蛋白9种,α-淀粉酶、载脂蛋白A-I、β-肌动蛋白和过氧化物还原酶2为两种组织中共同存在的显著差异表达蛋白。GO注释分析表明,显著差异表达蛋白分别定位于细胞外区、细胞质、线粒体和内质网,具有结合、转运、催化、免疫、抗氧化和细胞骨架等分子功能,参与物质与能量代谢、细胞膜转运、补体活化、应激反应、细胞与膜骨架组建、蛋白质折叠、氧化还原及铁离子运输等8个生物学过程。研究结果为进一步研究拟态弧菌的致病机制及其与宿主互作机制奠定了基础。 相似文献
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本实验室前期研究发现了未见报道的副结核分枝杆菌(MAP) GDSL脂肪酶家族蛋白MAP＿2739。为进一步分析MAP＿2739的酶学特性，本实验利用生物信息学网站和软件对MAP＿2739保守结构域、二级结构、3D同源建模等分析，进一步确认其属于GDSL脂肪酶家族蛋白。以MAP参考株基因组DNA为模板，PCR扩增获得map＿2739目的基因约891 bp，克隆于表达载体p ET-22b中，构建重组质粒p ET-22b-map＿2739，转化大肠杆菌感受态细胞，经IPTG诱导表达、蛋白复性、Ni-TNA柱亲和层析纯化后，利用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达及纯化效果，并通过western blot鉴定。结果显示，获得了以包涵体形式表达的经复性的纯化重组MAP＿2739蛋白(rMAP＿2739)。利用该蛋白制备兔多克隆抗体，通过ELISA方法检测，多抗血清效价为1:51 200。经差速离心法分离MAP参考株组分，利用该多克隆抗体为一抗，通过western blot检测，结果显示在细胞壁、细胞膜和细胞浆均出现35 ku的特异性条带，表明MAP＿2739为胞外蛋白。以对硝基苯基酯(p-NPs)... 相似文献
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结核分枝杆菌(MTB) PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用，调节宿主炎症反应，有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用，本实验利用PCR扩增pe26基因片段，构建重组载体p AIN-PE26，转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p AIN-PE26/Ms，经western blot鉴定结果显示，p AIN-PE26/Ms正确表达重组PE26蛋白(rPE26)。利用差速离心分离p AIN-PE26/Ms亚细胞组分，经western blot鉴定结果显示，r PE26定位于p AIN-PE26/Ms细胞壁。通过p AIN-PE26/Ms的菌落形态观察和生长曲线测定，结果显示，p AIN-PE26/Ms菌体表面较p AIN/Ms对照组更粗糙，脊不规则且相对较高，褶皱不明显；p AIN-PE26/Ms生长速度较对照组极显著增加(P<0.001)。利用H37Ra感染巨噬细胞，通过q RT-PCR检测pe26转录水平，结果显示，H37Ra感染巨噬细胞后pe26转录水平极显著增加(P<0.001)。利用p AIN-PE26/Ms感染巨噬细胞，分别通... 相似文献
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