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[目的]旨在通过构建秦川牛丙酮酸脱氢酶β亚基(Pyruvate dehydrogenase β subunit,PDHB)基因的重组腺病毒载体,为研究PDHB基因在牛前体脂肪细胞分化过程中的功能做准备。[方法]根据牛PDHB基因mRNA序列(GenBank Accession No.NM_001035435)设计引物,克隆该基因的编码区(Coding Sequence, CDS)序列。测序验证后将其重组到穿梭载体pAdTrack-CMV上,经PmeⅠ线性化后,转化到含有pAdEasy-1腺病毒骨架载体的E. coli BJ5183感受态细胞中进行同源重组,以获得重组质粒pAd-PDHB。再将经PacⅠ酶切线性化的pAd-PDHB转染到HEK 293A细胞中,进行病毒包装并扩增高滴度病毒Ad-PDHB,绿色荧光蛋白(GFP)标记法测定病毒滴度。将高浓度的Ad-PDHB病毒感染牛肌内前体脂肪细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PDHB的表达量。[结果]经测序验证,本实验克隆获得的牛PDHB基因CDS与数据库GenBank收录的序列一致。将PDHB基因CDS与穿梭载体pAdTrack-CMV重组并转染HEK 293A细胞后成功获得了重组腺病毒Ad-PDHB,其滴度为1.66×109 PFU.mL-1。腺病毒Ad-PDHB侵染牛肌内前体脂肪细胞后,PDHB在mRNA的表达水平比对照组高25.5倍。[结论]成功克隆了秦川牛PDHB基因并构建了重组腺病毒质粒pAd-PDHB,并获得能够在牛肌内前体脂肪细胞中过表达PDHB基因的高滴度重组腺病毒Ad-PDHB。 相似文献
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文章通过对宁夏海原县部分肉牛养殖企业和养殖户调研发现,目前西门达尔母牛牛群结构处于不同杂交代,F1代比例在0.48%(4/834),F2代平均在8.15%(68/834),F3代平均49.76%(415/834),F4代平均41.61%(347/834)。不同代数西门达尔杂交母牛,在繁殖性能上存在较大差异:品种越纯,性成熟期越长,尤其是生殖系统发育不全的母牛比例越高(3%~5%),产后恢复和配种时间越长。针对生产性能的差异,应采取相应的技术措施加以提高。 相似文献
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扁蓿豆是苜蓿属中唯一可以适应极端环境的物种,大量的研究证明其在低温寒冷条件下具有优良的抗逆性,且耐践踏、耐贫瘠、产量高,营养价值高,在改良天然草场、建立栽培人工草地、提高畜牧经济价值等方面具有重要意义。鉴于此,整合国内外学者在扁蓿豆优良抗逆性、遗传资源价值、生态价值、饲用及经济价值等多方面的研究工作进展,分析扁蓿豆对于川西北高原草地的适应性,为川西北草原退化治理、生态建设提出可行策略,同时也为苜蓿属牧草及其他牧草抗逆性育种改良研究提供参考依据。 相似文献
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