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烟曲霉植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母的高效表达 总被引:6,自引:0,他引:6
根据文献报道的烟曲霉植酸酶序列,设计引物以烟曲霉CCTCCAF93044的总DNA为模板进行梯度PCR,扩增出了1条约1.4kh的带,将该片段进行DNA序列测定,其序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列完全一致,但只编码完整的成熟植酸酶序列。将该片段克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K上,获得表达质粒pHBM108。该质粒转化毕赤酵母KM71所得重组子经PCR验证后进行诱导表达,其中一重组子经144h诱导,植酸酶表达量至少为1.25mg/ml,比同类报道的表达量高出60%以上,以植酸钠为底物测得酶活为11.17U/ml。 相似文献
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