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参考GenBank发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)全基因组序列,设计引物,通过PCR技术,从广东地区疑似"高热病"病猪的组织中,扩增17株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定分析.结果表明,17个PCV2分离株基因组全长为l 767或l 768bp.相似性比较发现... 相似文献
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根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)的核酸序列,设计了1对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中扩增出了ORF3基因,将其克隆到高效真核表达载体pEGFP- N2中,筛选出含有ORF3基因的重组质粒,命名为pEGFP-N2-ORF3.对此重组质粒进行测序分析,结果表明,克隆的ORF3基因与其他PCV2的ORF3核苷酸序列相似性为96.2%-99.0%,氨基酸序列同源性为90.5 %~98.1%.将重组质粒纯化后转染COS-7细胞,用PCR方法扩增出了特征性的基因片段,并采用特异性单抗进行间接免疫荧光,结果转染pEGFP- N2-ORF3重组蛋白在细胞核和细胞浆中均有表达,尤其在细胞核中表达量较高,且对细胞有一定的毒性.本研究为进一步探讨ORF3的结构和功能提供理论依据. 相似文献
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为深入研究鸭甲肝病(DHAV),本研究通过RT-PCR方法和血清中和法分离鉴定得到两株DHAV(命名为A株和H株).采用RT-PCR方法分段克隆这两个分离株的全基因组序列.分析结果显示,A株的基因组全长为7 647nt(不合polyA序列),5'和3'非编码区长度分别为583nt和314nt,单一ORF为6 759 nt,编码2 253个氨基酸;H株的基因组全长为7 648 nt(不含polyA序列),5'和3'非编码区长度分别为482 nt和314 nt,单一开ORF为6 852 nt,编码2 284个氨基酸.A和H分离株与DHAV-1参考株比较,其核苷酸同源性分别为93.4%~97%和92.7%~95.8%.遗传进化分析表明,DHAV-1型主要分为两个亚群,这两个病毒分离株分别属于不同的亚群. 相似文献
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为原核表达猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF3编码蛋白,本研究采用PCR方法以PCV2的CC株的基因组DNA为模板扩增ORF3基因,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白约为31ku,并且以包涵体形式存在;western blot分析表明,ORF3重组蛋白能够与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达的ORF3重组蛋白具有良好的反应原性. 相似文献
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