猪圆环病毒2型RPA恒温扩增检测方法的建立及初步应用     

黄超华  张全红  曹琛福  王潇  林彦星  史卫军  花群义 《中国兽医杂志》2018,(7)

利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),以猪圆环病毒2型Cap基因的保守序列为靶序列设计并筛选出一组特异性的引物和探针,建立了快速检测猪圆环病毒2型核酸的RPA方法。试验结果表明,该方法特异性强,猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)核酸检测结果均为阴性,灵敏性高,最低可检出核酸浓度为0. 87×10-4ng/μL,简单快速,且重复性好。利用所建立的RPA方法对183份临床样品进行检测,结果与实时荧光PCR方法符合率为98. 9%。本研究为猪圆环病毒2型核酸的快速检测提供了一种新方法,尤其适合基层实验室或养猪场的快速检测。  相似文献   

非洲猪瘟病毒实验室诊断方法的研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

林彦星  曹琛福  杨俊兴  阮周曦  吴江  吕建强  花群义 《中国兽医学报》2018,(10)

正非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)感染引起的猪的一种急性、烈性、高度传染性疾病,以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征~([1])。世界动物卫生组织(OIE)将ASF列为法定报告疫病,我国将其列为一类动物疫病~([2])。ASFV是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的唯一成员,  相似文献   

基于RT-RAA的禽流感H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法的建立     

杨芷翊  王新凯  史玉婷  付思源  张钰炘  曹琛福  贾伟新 《畜牧兽医学报》2023,(9):3803-3811

采用逆转录-重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)和成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)检测系统，建立一种快速、高灵敏度和高特异性的禽流感病毒(AIV)H5亚型核酸检测新方法。通过分析342条禽流感病毒H5亚型的HA基因序列，选取保守性区域设计具有强特异性的CRISPR RNA(crRNA)序列以及RT-RAA引物，并对检测体系中的主要成分LwaCas13a蛋白、crRNA、TaqMan探针、T7 RNA Polymerase、NTP Buffer Mix含量进行优化，建立了基于RT-RAA的AIV H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法。取10⁵～1 copies·μL^-1含有目的基因的质粒标准品和其他亚型禽流感病毒以及其他禽病病毒分别验证和评价该方法的灵敏性和特异性。结果表明，本文设计的RT-RAA引物与crRNA特异且灵敏，其最佳反应体系中主要成分用量分别为LwaCas13a蛋白(60μg·mL^-1)2.0μL、crRNA(100μmol·L^-1)3.2μL、TaqMan...  相似文献   

科学就在我身边——云南省科技活动周13年回顾     

曹琛 《农村实用技术》2014,(6):12-14

<正>五月的第三周又向人们走来了,在这一周里,亿万中国百姓将共赴一场"科技盛宴",品味独特的科学之美,这就是"全国科技活动周"。自2001年以来,每年五月的第三周被确立为全国"科技活动周",这是中国百姓了解科学知识和科学家活动的一周,是青少年走进实验室的一周,是科学家再创造  相似文献   

油菜秸秆纤维对水泥胶砂孔隙特征的影响     

张繁  谷悦  曹琛  刘保华 《中国农业科技导报》2022,24(6):189-195

为探究油菜秸秆纤维对硅酸盐水泥胶砂孔隙的影响及其作用机理,将处理后的油菜秸秆分别按照0、1%、2%、3%和4%质量分数的比例掺入水泥中,对不同秸秆纤维掺量水泥的标准稠度用水量及凝结时间进行测定,研究不同龄期（3、7、28 d）下油菜秸秆的掺量对水泥胶砂孔隙率和孔隙特征的影响。结果表明,随着油菜秸秆掺量的增加,水泥胶砂试块的表观密度逐渐减小,其中,当掺量为4%时,其表观密度相比基准组降低9.27%;当掺量为1%时,其孔径分布与基准组相近;当掺量为3%和4%时,两组的孔径分布相近,在龄期为28 d时,胶砂的有害孔占比分别为14.2%和15.4%,多害孔占比分别为24.15%和25.01%,与基准组相比,多害孔和有害孔增幅较大,均约为基准组的3.5倍。随着秸秆掺量的增加,水泥胶砂最可几孔径均减小;随着龄期的增加,水泥胶砂最可几孔径减小,多害孔及有害孔比例相对减少。显微形貌分析结果表明,油菜秸秆纤维掺量为1%时,与水泥界面粘接较好;掺量为3%和4%时,多害孔及有害孔增加,主要出现在秸秆纤维周围。  相似文献   

干露及盐度变化对毛蚶苗的影响试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

曹琛  匡少华  姜超  魏国庆 《河北渔业》2007,(5):38-38,51

毛蚶(scapharca subcrenate)主要分布在我国、朝鲜和日本沿海,具有营养丰富、肉质鲜美、生长速度快等特点,近年来,由于酷捕滥采和近海污染导致毛蚶资源急剧减少,商品价值随之提高.随着人民生活水平的不断提高,毛蚶的市场需求大幅增加,发展毛蚶养殖业势在必行.  相似文献   

锯缘青蟹人工育苗规模化试验   总被引：2，自引：0，他引：2  

黄金勇  吕晓民  魏国庆  匡少华  曹琛 《水产科学》2004,23(11):23-26

2003年营口市水产科学研究所继续开展辽宁省海洋与渔业厅下达的“锯缘青蟹人工育苗的研究”,实行规模化试验运作,取得了较好的经济效益,现将试验情况报告如下。1　试验材料与方法1 1　育苗设施的准备2003年在营口水产科学研究所鲅鱼圈试验基地进行生产性育苗实验。亲蟹培育  相似文献   

小反刍兽疫疫苗毒与野毒实时荧光RT—PCR鉴别检测方法的建立     

吕建强  杨俊兴  宗卉  张彩虹  花群义  曹琛福  陶虹  何云蔚  阮周曦 《中国兽医学报》2012,32(12)

为了建立鉴别检测小反刍兽疫疫苗毒与野毒的快速分子生物学检测方法,通过对自行测序的疫苗毒基因组序列及GenBank中登录的野毒基因组序列进行比对分析,设计了2套引物和TaqMan荧光探针,对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了小反刍兽疫疫苗毒与野毒实时荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性试验证实,该检测方法只能检测到目的病毒核酸,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,检测疫苗株的最低检测限可达1．38mg／L的总RNA,检测野毒株的最低检测限为0．16mg／L的核酸。对同一样品进行重复性检测,检测的荧光扩增曲线阈值完全重舍,证明其重复性极好。从180份临床样品中,检测出2份疫苗病毒株阳性样品,其余均为阴性。结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR方法能对小反刍兽疫疫苗毒及野毒进行鉴别检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性极好的优点,是开展小反刍兽疫疫情监测的有力工具。  相似文献   

非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立     

曾少灵  廖立珊  唐金明  杨俊兴  阮周曦  张彩虹  曹琛福  吕建强  秦智锋  林庆燕  孙洁  叶弈优  谢晓露  花群义 《动物医学进展》2013,(1):1-6

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。  相似文献   

进境冻畜禽产品中产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性的监测与分析     

阮周曦  唐金明  徐鹏  吕建强  陶虹  曾少灵  卢体康  秦智锋  曹琛福 《动物医学进展》2013,34(9)

为监测进境冻畜禽产品中受产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌污染的情况,采用ESBL显色平板初筛结合Vitek2 compact确证及药敏测试的方法,经过与美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐方法(M100-S22)进行比对,并且通过对249份进境冻畜禽产品进行了检测.结果表明,采用的方法与CLSI推荐方法相比,具有快速、准确、操作简便和特异性好等优点,有良好的推广价值.同时,经检测获得产ESBL大肠埃希菌18株,占样品总量的7.23％.所获菌株对氨苄西林、头孢唑啉和头孢曲松高度耐药,多重耐药率为16.67％～38.89％,为检验检疫部门评估进境冻畜产品中受产ESBL大肠埃希菌污染的情况提供了科学数据.  相似文献