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猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株PCR-HRM鉴别检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
基于新型的PCR产物分析技术-高分辨率熔解曲线(HRM),大量分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因序列的特点,建立鉴别PEDV CV777疫苗株与野毒株的PCR-HRM分析方法。在ORF1保守区域设计区分引物,同时用普通的RT-PCR方法进行对比。检测19份临床样品中,PCR-HRM方法检测均为阳性且鉴定为野毒株,普通RTPCR之后凝胶电泳分析检测18份阳性,为野毒株。结果表明,PCR-HRM方法具有特异性好,灵敏度高,PCR扩增之后产物无需开盖分析,极大地避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。 相似文献
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为了解广东部分地区猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株的基因型和遗传变异情况,本研究根据GenBank中PCV2的核苷酸序列设计针对ORF2基因的1对特异性引物,从分离于广东省的8株PCV2分离株BL、HD、Li、GD01、GD02、HD01、HD02和HD03株的细胞培养物中扩增ORF2基因,扩增片段克隆到pMD18-T上,获得重组质粒,并对其进行测序。序列分析结果表明,8株PCV2分离株ORF2基因与其他PCV2 ORF2基因核苷酸序列同源性为89.7%~100%,氨基酸序列同源性为87.2%~99.6%,进化分析结果表明,其中7株分离株处于同一分支,属于PCV2b-1A/1B,HD01株属于PCV2b-1C。 相似文献
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5-羟色胺(5-HT)介导的肺血管重构是肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)形成的重要病理机制,而5-羟色胺转载体抑制剂已被证明能够抑制肉鸡肺血管重构,降低PHS的发病率,但其机理尚不十分清楚.为了从肺组织胶原蛋白沉积的角度探讨5-羟色胺转载体抑制剂抑制肉鸡肺血管重构的机理.本试验采用翅静脉注射纤维素颗粒的模型诱发肉鸡PHS,分别给诱病肉鸡灌服两种5-羟色胺转载体抑制剂,即氟西汀(fluoxetine)和西酞普兰(citalopram).使用分光光度法测量肉鸡肺组织胶原蛋白含量,采用ELISA方法测量肺组织5-羟色胺浓度,观察各组肉鸡肺组织胶原蛋白含量和5-羟色胺浓度的差异.结果显示,发病组肉鸡肺组织5-羟色胺浓度和胶原蛋白含量高于正常对照组肉鸡,而氟西汀和西酞普兰均能降低PHS肉鸡肺组织胶原蛋白含量和5-羟色胺浓度,表明5-羟色胺转载体抑制剂能降低肺成纤维细胞合成胶原蛋白的能力,进而影响肺血管重构和PHS的发生. 相似文献
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高分辨率熔解曲线技术(High resolution melting,HRM)是近年发展起来的基于实时荧光定量技术分析核苷酸突变而进行基因分型的一种新型技术。比较了几种动物疫病病原(猪瘟病毒、禽白血病病毒、鸡艾美耳球虫株)的不同扩增片段(C202、ALV450、En573和C965)、不同荧光染料(LC Green、SYTO9和SYBR GreenⅠ)和不同仪器[Light Scanner96(Idaho),Light Cycler480(Roche)和Rotor-Gene Q(Qiagen)]在HRM基因分型上的异同,揭示了HRM技术对病原体进行分型时,不同扩增片段和不同性质荧光染料对其分型结果影响较大:拥有多个熔解区间的核酸序列比单独1个SNP位点特异性高,更适合于分型;核酸相邻熔解区间Tm差值影响实际HRM分型结果;饱和荧光染料(LC Green和SYTO9)比非饱和染料(SYBR GreenⅠ)分辨率更高,更适合用于HRM分析,并且不同浓度荧光染料对Tm值有一定的影响;不同HRM仪器之间HRM结果无明显差异。 相似文献
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