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[目的]根据SCoT多态性对湖南甜橙变异类型进行鉴定和分析。[方法]首先对SCoT反应体系进行优化,并筛选合适的引物,然后对24份试材进行SCoT标记,获得的目的片段克隆测序,通过测序结果探讨其遗传变异。[结果]甜橙SCoT标记的20μl优化反应体系为:DNA模板80ng,Mg2+1.6mmol/L,dNTPs0.3mmol/L,引物0.2μmol/L,TaqDNA聚合酶用量1.6U,扩增产物在100~2000bp,扩增条带明亮清晰,反应体系具有良好的稳定性和可重复性。24份试材的测序片段的大小为1090-1091bp,一致性达到99.84%,存在单碱基缺失与替换;利用单碱基变异可以区分其中的12个甜橙变异株系和‘安江香柚’。[结论]本研究将为甜橙的育种工作提供科学的理论依据。 相似文献
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SCoT结合克隆测序鉴别湖南甜橙变异类型 总被引:6,自引:1,他引:5
本试验对SCoT反应体系进行优化,并筛选合适的引物,然后对24份试材进行SCoT标记,获得的目的片段克隆测序,通过测序结果探讨其遗传变异;结果表明,甜橙SCoT标记的20 μL优化反应体系为:DNA模板80 ng,Mg2+浓度1.6 mmol/L,dNTPs浓度0.3 mmol/L,引物浓度0.2 μmol/L,Taq DNA聚合酶用量1.6 U,扩增产物在100~2000 bp之间,扩增条带明亮清晰,反应体系具有良好的稳定性和可重复性。24份试材的测序片段的大小为1090~1091 bp,一致性达到99.84%,存在单碱基的缺失与替换,BLAST结果显示,该序列的编码蛋白质与核糖体蛋白S3的N端同源性高;利用单碱基变异可以区分其中的12个甜橙变异株系和‘安江香柚’,其他变异株系还需要结合其它的分子标记技术来进行鉴别,有待进一步研究。 相似文献
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