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采用RT-PCR技术成功扩增禽流感病毒HA主要抗原位点基因片段，然后将该基因片段克隆到PproEXHTb表达载体上。并对重组表达质粒进行PCR、酶切鉴定，通过序列测定验证读码框正确，最后将重组表达质粒电转化BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达。结果获得了预期的融合蛋白表达，所表达蛋白质的分子量约为38ku，West-ern-blotting分析该融合蛋白具有很好的免疫原性。该研究为建立检测禽流感病毒Hs亚型和进行流行病学调查提供了材料。 相似文献
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鸭乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用 总被引：2，自引：2，他引：0
为建立一种快速、特异的鸭乙型肝炎病毒(DHBV)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,设计一对引物扩增DHBV基因组,将其克隆到pMD-18-T载体上,然后以该重组质粒为模板,选择DHBV S基因保守序列设计一对定量PCR引物,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并用所建立的方法评价拉米夫定和阿德福韦酯在鸭体内对DHBV-DNA复制的抑制效果。结果表明:该方法能特异性检测到DHBV;相关系数为1.00,扩增效率为105%;敏感度高,最低检测限为70个拷贝。拉米夫定和阿德福韦酯对DHBV感染后鸭外周血DHBV-DNA的复制均有很好的抑制效果,但停药后会出现轻度"反跳"现象。建立的DHBV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,可用于抗HBV药物的评价。 相似文献
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近年来,临床治疗乙肝的核苷类药物发展很快,其中以拉米夫定为代表的核苷类药物被广泛应用,核苷类药物主要作用HBV聚合酶来抑制病毒的复制,同时在临床上也出现了严重的耐药问题,这些耐药大多数与乙肝病毒聚合酶基因突变有关。本文就乙肝病毒基因型耐药相关问题综述如下。 相似文献
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流感病毒是正粘病毒科（Orthomyxoviridae）正粘病毒属分节段单股负链RNA病毒,该病毒能感染人和多种动物给人类社会造成严重危害。据统计每年流感患者达6～12亿,造成25～30万人死亡。1997年香港爆发了禽流感,首次出现跨种属感染现象,造成18人感染,6人死亡的严重后果,随后2003年香港地区和2004上半年亚洲十几个国家及欧美等国家接连爆发高致病性的禽流感并感染人类引起死亡,因此世界各国都极度重视对该病毒的研究。随着反向遗传学技术的兴起,该技术在对流感病毒的复制及调控机制、流感病毒的致病性、制备新型疫苗等各项研究中起到了举足轻重的作用。本文作者将就反向遗传学技术建立及其在流感病毒中应用概况和前景作简要概述。 相似文献
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