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为了探讨信号传导子及转录激活子1在胚胎植入过程中的作用, 取正常妊娠(6W～11W)人工流产子宫蜕膜组织30例, 自然流产蜕膜组织30例, 利用RT-PCR, 原位杂交, 免疫组织化学, 蛋白印迹, 免疫荧光化学方法对流产组与正常妊娠蜕膜中STAT1进行定性定量检测. 结果表明: STAT1在正常妊娠6W～11W蜕膜表达呈逐渐降低趋势, 但差异无统计学意义(p＞0.05), 流产组蜕膜STAT1平均表达量显著高于正常妊娠组(p＜0.05). 说明在自然流产子宫蜕膜组织中, STAT1高表达可能通过促进蜕膜细胞过度凋亡和抑制细胞增殖而影响胚胎正常植入, 这可能是诱发流产的原因之一. 相似文献
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探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的表达及其意义 方法: 收集妊娠1-5 d的早孕小鼠子宫内膜,利用RT-PCR、免疫组织化和Western-blot方法检测ICAM-1基因及蛋白的表达及分布;着床期小鼠单侧宫角注射ICAM-1单抗,观察胚胎着床变化. 结果: 1. ICAM-1 mRNA孕D1到D3逐渐增高,D4达最高,D5开始降低;2. 子宫内膜上皮细胞,基质细胞,血管上皮细胞均有ICAM-1的表达,阳性细胞数量、表达强度和表达时间呈现一定规律性;3. ICAM-1 D1、D2、D3略有升高,D4有强表达,D5略有下降;4. 单侧宫角注射ICAM-1单抗后,该侧胚胎发生流产. 结论: ICAM-1在早孕小鼠子宫内膜的表达变化及分布,提示ICAM-1参与了胚泡着床,ICAM-1可能起调节子宫内膜的局部免疫作用. 相似文献
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小鼠胚泡围着床期子宫内膜骨桥蛋白的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：探讨骨桥蛋白（OPN）在小鼠胚泡围着床期子宫内膜组织中的表达情况.方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫组化等方法研究了OPN在孕d3.5、d4.5、d5.5、d6.5及非孕小鼠子宫内膜上的表达.结果：OPN在胚泡围着床期表达较非孕小鼠子宫内膜的表达显著增加,孕d3.5表达升高,d4.5（窗口期）达最高峰,d5.5表达降低、d6.5急剧降低.OPN主要在小鼠子宫内膜的腺上皮和腔上皮表达.结论：OPN在小鼠胚泡围着床窗口期大量表达,提示其可能参与了胚泡着床并起着重要的作用. 相似文献
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采用免疫荧光技术联合共聚焦技术研究不同培养细胞中蛋白的表达及定位.结果发现:①同样以丙酮固定293细胞,不用0.5%Triton X-100处理,着丝粒蛋白E亚型(CENP-E)在分裂期细胞核周浓聚,核内未见;而用0.5%TritonX-100处理后,CENP-E呈散点状分布于分裂期细胞的核内.②分别以甲醇、95%乙醇和4%多聚甲醛固定并以1%TritonX-100处理k562细胞,不同固定剂处理组间结果无明显差异,信号转导与转录激活因子(STAT3)均定位于胞浆.共聚焦系统PMT=511时,显示胞核染色适中,核仁染色明显,而PMT=593时,整个核呈饱和染色状,微细结构不清楚.③以2%甲醛联合0.5%TritonX-100处理平滑肌细胞,固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)在整个细胞中呈弥散性分布,核内含量较高,高尔基体上SCAP无特异性高表达.结论:是否使用TritonX-100处理对293细胞中核蛋白CENP-E的定位具有较大影响;k562细胞对醛类固定剂及醇类固定剂无特殊选择性,图片采集时共聚焦参数PMT对蛋白定位结果也有影响;醛类固定剂和Triton联用可准确定位SCAP在平滑肌细胞中的表达.Abstract： The expression and location of proteins in single cells cultured under different conditions were studied with a laser scanning confocal microscope. CENP-E appeared mainly around the nucleus in HEK293 cells by fixing with acetone without 0.5% Triton X-100 treatment, but localized mainly in the nucleus when the cells were fixed with acetone plus further 0.5 %Triton X-100-PBS solution and scattered in the nucleus with condensed points. Plus l% Triton treatment, K562 cells fixed with 4% paraformaldehyde, methanol or 95 % ethanol all showed that STAT3 protein mainly distributed in cytoplasm at the edge of the cell body, the nucleus occupied a greater part of the cell body with PI staining, nucleolus staining seemed stronger under PMT= 511, but seemed the same as the other part of the nucleus under PMT=593. SCAP (SREBP cleavage-activating protein) could be detected in cytoplasm and was more accumulated in nucleus in smooth muscle cells fixed with 2 % formaldehyde and 0.5 % Triton penetrating, and Golgi apparatus were found to scatter around the nucleus. In conclusion, it is important to locate CENP-E protein in HEK293 cells with TritonX-100 by immunofluorescence microscopy. SCAP in smooth muscle cells and STAT3 expression in K562 cell can be exactly located with the combination of formaldehyde and Triton penetrating. STAT3 expression in k562 cells fixed with formaldehyde or spirits fixative has no difference.The confocal system itself, such as PMT gain, can also affect the location of proteins in single cells. 相似文献
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目的：探讨基质金属蛋白酶10（MMP10）基因及其蛋白在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律及意义.方法：采用RT-PCR、原位杂交、免疫组化和Western-blot法分别检测受孕3-7 d的小鼠子宫内膜MMP10基因和蛋白的表达及分布,并以未孕小鼠子宫内膜为对照.结果：①早孕小鼠子宫内膜组织MMP10基因和蛋白的表达较未孕小鼠均显著增加,且表达量从着床前期到着床后期逐渐增强,其中d6、d7表达最强,与其他妊娠各期比较差异有统计学意义;②MMP10基因和蛋白表达主要分布在子宫内膜间质细胞.结论：MMP10在早孕小鼠子宫内膜组织中高表达可能有利于降解细胞外基质,促进胚胎滋养细胞的侵袭,参与着床中子宫内膜的蜕膜化过程以及胚胎的早期增殖与分化. 相似文献
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小鼠胚泡着床期LongSAGE文库中双标签的制备研究 总被引：1，自引：1，他引：0
研究探讨小鼠胚胎着床期LongSAGE文库构建过程中总RNA提取、cDNA合成及双标签(D itags)制备方法,优化PCR扩增中双标签PCR的最佳模板稀释度及扩增循环次数。 相似文献
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着丝粒特异性蛋白CENP-Ⅰ的原核表达、纯化及抗体制备 总被引：2，自引：0，他引：2
用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获得编码CENP-Ⅰ蛋白第1-293位氨基酸的CENP-ⅠcDNA序列,采用基因体外重组法将其克隆到原核表达载体pET-32a（＋）内;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,用IPTG诱导表达、Ni^2＋-NTA亲和层析纯化获得高纯度的重组蛋白质;用纯化的蛋白质免疫家兔制备抗血清,琼脂糖免疫双扩法和Western blot鉴定得到高效价的特异性抗CENP-Ⅰ抗体. 相似文献