利用变性梯度凝胶电泳分析正红菇菌根围土壤真菌群落多样性     

肖冬来  陈丽华  陈宇航  杨菁  黄小菁 《热带作物学报》2013,34(12):2508-2512

以正红菇（Russula griseocarnosa）菌根围土壤为研究对象,通过提取土壤基因组DNA,以通用引物扩增真菌18S rRNA基因V1+V2区,将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis）,获得土壤微生物群落的DNA特征指纹图谱,并对图谱中的优势条带回收测序,通过Blast进行同源性比对并构建系统发育树,进而分析正红菇菌根围真菌群落组成及多样性。同源性比对结果表明,在回收测序的19条DGGE条带中,4条为非真菌真核生物序列,系统发育分析显示全部序列可以分为4类菌群,GroupⅠ主要为担子菌门（Basidiomycota）真菌,GroupⅡ主要为子囊菌门（Ascomycota）真菌,GroupⅢ为未知真菌,GroupⅣ主要为节肢动物门生物（Arthropoda）。  相似文献   

广叶绣球菌子实体不同发育阶段的比较蛋白质组学分析     

肖冬来  马璐  应正河  江晓凌  林衍铨 《食用菌学报》2016,(3)

利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)标记结合二维液相色谱串联质谱(two-dimensional liquid chromatography tandem mass spectrometry,2D LC-MS/MS)技术,研究广叶绣球菌(Sparassis latifolia)原基期、幼菇期和成熟子实体阶段的差异表达蛋白质组.采用Q-Exactive质谱鉴定并经ProteinPilot软件搜库,对所获得的差异蛋白进行GO (gene ontology)、KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)和转录因子注释分析.结果共鉴定到可信蛋白2305个,其中2219个蛋白具有相对定量信息.与原基期相比,幼菇期显著上调蛋白104个,下调蛋白142个,子实体阶段显著上调蛋白155个,下调蛋白460个.GO分子功能提示这些差异性蛋白主要参与催化活性、蛋白结合和水解酶活性.KEGG代谢通路分析结果显示,差异蛋白主要涉及碳代谢、氨基酸合成、核糖体、糖酵解/糖衍生等代谢过程.差异蛋白中与信号传导和转录因子相关的蛋白数量分别为27个和7个.  相似文献   

20株香菇菌株的ISSR和F-MSAP分析     

肖冬来  张迪  林衍铨  杨菁 《福建农业学报》2018,(8)

利用简单序列重复区间扩增多态性(inter-simple sequence repeat,ISSR)和荧光标记甲基化敏感扩增多态性(fluorescence-labeled methylation-sensitive amplified polymorphism,F-MSAP)分子标记技术对收集到的20株香菇Lentinula edodes菌株进行遗传及甲基化多样性分析。ISSR结果表明,8对引物共可扩增出98条稳定清晰可辨的条带,其中多态性条带89条,多态性比率为90.82%,样品间的遗传相似系数范围为0.520 4~0.9897。F-MSAP结果表明,15对引物共扩增产生13 487个CCGG位点。在全部检测位点中,半甲基化位点为1 704个,平均半甲基化率12.6%;全甲基化位点为1 865个,平均全甲基化率13.8%。进一步将MSAP数据分为甲基化敏感多态性(methylation sensitive polymorphism,MSP)和甲基化不敏感多态性(methylation insensitive polymorphism,MISP)。Mantel检测结果表明,ISSR与MISP分子标记的分析结果有显著的相关性,但ISSR与MSP分子标记的分析结果无显著相关性。说明香菇不同株系间广泛存在DNA甲基化多样性,在育种中具有重要的应用价值。  相似文献   

绣球菌瓣片与基部多糖的分子量分布比较     

张迪  王宏雨  肖冬来  林衍铨 《福建农业学报》2017,(10):1096-1100

为了明确广叶绣球菌Sparassis latifolia子实体的瓣片、基部可溶性多糖分子量分布差异,将新鲜绣球菌子实体经冷冻干燥、热水提取得到绣球菌瓣片多糖和基部多糖,通过β-葡聚糖酶酶解试验和高效凝胶渗透色谱(HPSEC)对绣球菌瓣片、基部多糖的分子量分布规律进行研究。结果表明:广叶绣球菌的瓣片多糖与基部多糖的重均分子量和分子量分布显著不同,绣球菌的瓣片多糖的重均分子量为3.88×10~5 Da,主要成分的重均分子量为4.30×10~5 Da;而基部多糖的重均分子量为1.43×10~6 Da,主要由2.85×10~4 Da的小分子量部分和分子量大于2×10~6 Da的大分子量部分构成。酶解试验结果表明绣球菌基部多糖的水溶液中分子量大于2×10~6 Da的部分无法被β-葡聚糖酶酶解。  相似文献   

酵母双杂交系统筛选与水稻黑条矮缩病毒P6互作的水稻蛋白   总被引：1，自引：0，他引：1  

肖冬来  邓慧颖  谢荔岩  吴祖建  谢联辉 《热带作物学报》2010,31(3):435-439

RBSDV编码的非结构蛋白P6为该病毒的沉默抑制子。为了研究P6与寄主水稻间的互作关系,首先利用RT-PCR扩增,获得水稻黑条矮缩病毒P6基因,并将其构建到酵母表达载体pGBKT7上,自激活验证表明,P6蛋白无自激活活性。利用酵母双杂交系统顺序转化法从水稻cDNA文库中筛选,获得4个与RBSDVP6互作的寄主因子,分别为水稻内囊体抗坏血酸过氧化物酶、醛糖1差向异构酶、immutans蛋白基因同源蛋白和一个功能未知蛋白。分析了3个已知功能的寄主因子在病毒侵染过程中的可能功能。  相似文献   

水稻条纹病毒NS3蛋白与水稻 3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）     

肖冬来  贾东升  吴建国  杜振国  谢荔岩  吴祖建  谢联辉 《中国水稻科学》2010,24(5):493-496

 水稻条纹病毒（rice stripe virus,RSV）NS3蛋白为病毒的沉默抑制子。利用酵母双杂交技术,从水稻cDNA文库中筛选出一个与RSV NS3蛋白互作的基因片段。推测该基因的功能是编码水稻3 磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）。双分子荧光互补实验进一步验证了NS3与GAPDH存在互作。瞬时表达实验表明,GAPDH与GFP基因融合蛋白在本氏烟表皮细胞细胞质中大量积累。此外,讨论了GAPDH蛋白在RSV侵染水稻过程中可能的功能。  相似文献   

香菇挥发性风味成分的气相色谱-离子迁移谱分析     

肖冬来  张迪  黄小菁  杨菁 《福建农业学报》2018,(3)

利用气相色谱-离子迁移谱(gas chromatography-ion mobility spectrometry,GC-IMS)技术分析不同香菇干样挥发性组分的指纹图谱。根据离子迁移数据利用热图聚类和主成分分析不同样品间的差异。热图聚类分析可将27份香菇材料分为2大类;PCA分析表明,前2个主坐标的方差贡献率分别为30.2%和26.9%。结果表明气相色谱偶联离子迁移谱技术对构建香菇挥发性物质指纹图谱及挥发性组分数据库具有潜在的应用价值。  相似文献   

金属离子对香菇纤维素酶、漆酶和木质素过氧化物酶活性的影响     

肖冬来  张迪  林衍铨  杨菁 《中国食用菌》2018,(3)

测定了6种常见金属离子对香菇(Lentinula edodes)羧甲基纤维素酶、漆酶和木质素过氧化物酶活性的影响。结果表明,Na~+、K~+、Ca~(2+)、Mn~(2+)、Fe~(2+)、Mg~(2+)对香菇羧甲基纤维素酶活性具有激活作用,其中K~+激活效果最强;Fe~(2+)能明显抑制漆酶活性;Mn~(2+)、Ca~(2+)、K~+、Mg~(2+)和Fe~(2+)对木质素过氧化物酶活性有抑制作用,Na~+对木质素过氧化物酶活性具有激活作用。  相似文献   

灰飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建及分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

肖冬来  邓慧颖  谢荔岩  吴祖建  谢联辉 《植物保护》2011,37(1):19-23

以灰飞虱（Laodelphax striatellus Fallen）mRNA为起始模板,利用Gateway技术构建了灰飞虱酵母双杂交cDNA文库。经过检测表明：构建的初级cDNA文库的库容量为1.85×107 cfu;扩增文库滴度为7.7×108 cfu/mL,重组率约为97%;扩增文库插入片段主要集中在1 000~1 500 bp之间。随机挑取10个克隆,经测序与GenBank数据库比对结果显示7个克隆具有同源序列,其中L2、L9为已公布的灰飞虱序列。灰飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建为克隆全长目的基因及研究灰飞虱与其传播的水稻病毒间的互作奠定了基础。  相似文献   

福建正红菇遗传多样性分析     

肖冬来  陈宇航  杨菁  黄小菁 《福建农业学报》2013,(9):902-905

以采自福建省山区的正红菇Russula griseocarnosa为研究材料,进行ITS(internal transcribed spacer)、RPB2(the second largest subunit of the nuclear RNA polymerase enzyme II)保守区段克隆测序和序列同源性比对。将从GenBank中获得的部分红菇属物种ITS和RPB2序列与正红菇序列通过最大简约法进行系统发育分析。基于ITS序列构建的系统发育树表明,福建正红菇与云南大红菌Russula griseocarnosa X.H.Wang,Zhu L.Yang&Knudsen,sp.nov.间序列差异较小,亲缘关系较近,以99%的支持率聚为一簇。福建正红菇与欧洲红菇Russula vinosa及玫瑰红菇Russula rosea间序列差异较大,亲缘关系较远,在系统发育树上聚为不同分枝。基于RPB2序列构建的系统发育树也表明福建正红菇与云南大红菌聚为一簇(支持率94%),而与玫瑰红菇聚为不同分支。  相似文献