蜡梅几丁质酶基因的克隆与原核表达   总被引：2，自引：1，他引：1  

谢树章  秦平伟  张迷  胡雨晴  李名扬  眭顺照 《林业科学》2009,45(12)

在构建好蜡梅花cDNA文库并进行EST分析基础上,通过随机克隆测序,得到1个蜡梅几丁质酶的cDNA基因,命名为Cpchia(GenBank登录号:FJ749130).Cpchia cDNA全长为1 184 bp,开放阅读框为954 bp,编码317个氨基酸,其结构包括信号肽、几丁质结合域、可变交联区、催化区,无C端延伸区,为Class Ⅰ b型胞外几丁质酶,属于几丁质酶第19家族.将Cpchia克隆到原核表达载体pET-28a(+),在大肠杆菌BL21细胞中以包涵体形式表达融合蛋白,利用透析法获得复性蛋白,其几丁质酶活性经DNS法检测达到200 U·mL~(-1).酶活性和稳定性分析表明,试验条件下,pH 7.0有利于酶的稳定和活性发挥,40 ℃活性最高,在0 ℃低温下也有较高活性.上述结果说明,分离的Cpchia基因编码蛋白具有几丁质酶活性,而且可能与蜡梅花的抗寒性形成有关.  相似文献   

蜡梅水通道蛋白基因分子特征分析及植物表达载体的构建     

张迷  马婧  马鑫  胡雨晴  眭顺照  李名扬 《西南大学学报》2010,32(6)

在已构建的蜡梅花cDNA文库及EST分析的基础上,通过对文库cDNA克隆全长测序,得到了1个蜡梅水通道蛋白基因,命名为CpAQP(GenBank登录号为:GU433105).cDNA全长1154 bp,最大ORF 810 bp,编码269个氨基酸.聚类分析和同源性比对表明,该蛋白基因属于TIPS亚族类,具有高度保守的MIP家族结构域.该蛋白具有6个跨膜结构,N-末端和C-末端都在细胞内.利用NetPbos 2.0对CpAQP蛋白进行磷酸化位点预浏,该蛋白C端丝氛酸磷酸化,可能在植物胁迫和亚细胞定位中起着重要作用.将该基因的cDNA编码序列连接到植物表达载体pCAMBIA2301g中,成功构建了CpAQP基因的植物表达载体pCAM-CpAQP.  相似文献   

植物蛋白酶抑制剂抗虫基因工程研究现状与对策研究     

曹鑫  孙文婷  邹世慧  胡雨晴  陈雪  眭顺照 《南方农业》2011,(5):4-10

植物蛋白酶抑制剂基因作为一种抗虫基因,具有广泛的抗虫谱,并且与其他抗虫基因相比具有很大的优势。文章基于蛋白酶抑制剂的研究现状,分析蛋白酶抑制剂抗虫基因工程中存在的各种问题,提出了相应的解决方法。  相似文献   

植物蛋白酶抑制剂抗虫基因工程研究现状与对策研究     

曹鑫  孙文婷  邹世慧  胡雨晴  陈雪  眭顺照 《西南园艺》2011,(5):4-10

植物蛋白酶抑制剂基因作为一种抗虫基因，具有广泛的抗虫谱，并且与其他抗虫基因相比具 有很大的优势。文章基于蛋白酶抑制剂的研究现状，分析蛋白酶抑制剂抗虫基因工程中存在的各种问题，提出了相应的解决方法。  相似文献   

梁平柚葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达     

马鑫  王斌  胡雨晴  李名扬  眭顺照 《西南大学学报(自然科学版)》2011,33(8)

基于GenBank公布的葡萄糖基转移酶(LGT)基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以梁平柚成年树幼叶总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增葡萄糖基转移酶基因,将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了该基因的融合表达载体pET28a-CmLGT,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中.经1.0mmol/LIPTG诱导表达获得大小约为62Kd的目的融合蛋白.  相似文献   

蜡梅热激蛋白基因CpHSP1的克隆与表达分析     

胡雨晴  孙文婷  马婧  曹鑫  李名扬  眭顺照 《林业科学》2011,47(5)

热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是生物体受高温刺激而合成的一类应激蛋白,根据分子量的大小可分为HSP100s,HSP90s,HSP70s,HSP60s,smHSPs(small HSPs)5大类(Waters et al.,1996).各类HSPs在植物体内普遍存在,其中又以smHSPs最为常见.smHSPs是由核基因编码的一类分子量为15～42ku的HSPs,其典型特征是C端有1个高度保守的ACD(α-crystallin domain)结构,能够快速地对热激刺激产生响应.早期的研究者根据DNA序列相似性分析、免疫交叉反应以及胞内定位方法将smHSPs分为5类,其中2类定位于细胞质,即细胞质I类和细胞质Ⅱ类smHSPs,其余3类分别存在于叶绿体(chlorplastid,CP)、内质网(endoplasmic reticulum,ER)和线粒体(mitochondria,Mt)中(Waters et al., 1996; Sun et al., 2002; Wang et al.,2004 ) .  相似文献   

葡萄木质素相关基因PAL、4CL和CAD特征鉴定及其应答赤霉素在果实发育过程中的作用     

汤崴  白云赫  胡雨晴  王晨  崔梦杰  张文颖  房经贵 《南京农业大学学报》2019,(3)

[目的]本文旨在研究苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)、4-香豆酸-辅酶连接酶基因(4CL)和肉桂醇脱氧酶基因(CAD)在葡萄(Vitis vinifera L.)‘白罗莎’核木质素合成过程中的作用,进而探究其在应答赤霉素(GA)调控果实发育尤其在种子发育过程中的潜在作用,分析其在诱导果实无核过程中的作用。[方法]采用生物信息学分析、基因芯片和RT-qPCR等方法,对葡萄VvPAL、Vv4CL和VvCAD基因定位、结构和启动子作用元件分析,对其编码蛋白相似性、结构域以及互作蛋白进行分析,并鉴定其应答GA在果实不同组织不同时期的表达模式。[结果]葡萄VvPAL、Vv4CL和VvCAD与其他物种同源分析比对发现,其内含子与外显子数量及其分布相似。基因启动子分析表明,3个基因均含有胚乳发育相关组织特异性元件,且Vv4CL基因含有GA响应元件。3个基因所编码蛋白进化保守性较强,与其他物种比对后发现它们含有相同的蛋白功能结构域并且作用元件相似。亚细胞定位预测显示其主要集中在细胞质和细胞膜中表达,其互作蛋白主要是肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、咖啡酸氧甲基转移酶(OMT)等木质素合成过程中的关键酶。葡萄芯片电子表达谱发现,VvPAL和Vv4CL基因在根、茎等木质化程度相对较高的组织中高表达,而VvCAD基因则只在种子中相对高表达。RT-qPCR结果显示,GA在种子某些特定时期极显著下调VvPAL、Vv4CL、VvCAD基因的表达。[结论]VvPAL、Vv4CL和VvCAD基因参与葡萄果实发育过程的调控,且GA可能通过下调这3个基因的表达从而抑制葡萄核发育。  相似文献   

基于EST-SSR分子标记技术的高良姜栽培类型的鉴别     

赵全杰  谢腾  胡雨晴  唐晓敏  张春荣  杨全 《分子植物育种》2023,(2):557-565

高良姜(Alpinia officinarum Hance)的根茎是著名的“十大广药”之一,具有较高的药用和食用价值。本研究基于EST-SSR分子标记技术,对采自广东省徐闻县的5种高良姜栽培类型(黑鳞蜂窝姜,白鳞蜂窝姜,鸡姜,牛姜,竹头姜)及采自海南省的2种高良姜栽培类型(文昌高良姜,万宁高良姜)进行遗传多样性分析,以构建不同高良姜栽培类型的EST-SSR数字指纹图谱及鉴别体系。结果表明,对EST-SSR位点的100对引物进行筛选,得到扩增条带清晰且稳定的引物21对,占引物总数的21%。利用21对引物对7种高良姜栽培类型基因组DNA进行扩增共得到239条条带,平均每对引物的扩增条带有11.4条,其中多态性条带204条,占85.36%。对这21个多态性EST-SSR位点进行分析,其中多样性指数(I)平均值为1.06,观察杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、Nei基因多样性指数、多态性信息含量(PIC)的平均值均在0.5以上。其中14个EST-SSR位点的PIC值大于0.5,属于高多态性位点;5个EST-SSR位点的PIC值在0.25～0.5,属中度多态性位点。建立不同栽培类型高良姜EST...  相似文献   

不同来源托鲁巴姆种子的发芽特性研究     

丁小雪  汪炳良  海睿  胡雨晴  米月华  叶红霞 《浙江农业学报》2019,31(3):420

野生茄子托鲁巴姆(Solanum torvum)是目前应用最广泛的茄子砧木品种。针对当前种子市场上托鲁巴姆供货渠道多、种子质量参差不齐等问题,以10份不同来源的托鲁巴姆种子为材料,研究GA₃浓度及GA₃浸种时间对种子发芽势、发芽率及发芽指数的影响。试验结果显示,在未经GA₃处理的条件下,不同来源的托鲁巴姆种子发芽势、发芽率存在显著差异,其中仅2份托鲁巴姆种子的发芽率达到90%以上。托鲁巴姆种子来源、GA₃浓度对种子发芽率、发芽指数存在极显著影响,GA₃浸种时间对种子发芽指数存在极显著影响。在种子发芽率方面,种子来源×GA₃浓度、GA₃浓度×GA₃浸种时间以及种子来源×GA₃浓度×GA₃浸种时间的互作效应达到显著或极显著水平;而在种子发芽指数方面,种子来源、GA₃浓度、GA₃浸种时间之间的一级互作、二级互作均达到极显著水平。表明不同来源的托鲁巴姆种子适宜采用不同的GA₃浓度和GA₃浸种时间,以达到最佳的种子发芽效果。试验结果还表明,在购买的10份托鲁巴姆种子中,有9份发芽率未达到种子包装袋标识的发芽率水平。  相似文献