尾叶桉GLU4肉桂酰-辅酶A还原酶基因克隆及原核表达     

陈博雯  盖颖  蒋湘宁 《中南林业科技大学学报(自然科学版)》2014,(11)

肉桂酰-辅酶A还原酶(Cinnamoyl Co-A Reductase,CCR)是木质素合成中的关键酶,根据植物中CCR保守序列设计引物,以尾叶桉GLU4嫩茎为材料克隆到其CCR基因,命名为Eu CCR。该基因g DNA长2 918bp,c DNA长1 045 bp,CDS区编码336个氨基酸。EuCCR核酸序列与Gen Bank已登录的桉属植物CCR基因同源性达到96%以上,与伞房属、杯果木属植物CCR的同源性达85%以上,其编码的氨基酸序列经比对发现具有完整FR_SDR_e结构域及NADP结合位点和底物结合位点,与可可树等植物中CCR基因编码序列同源性也在84%以上,确定为CCR基因。对EuCCR蛋白序列理化性质及结构进行生物信息学分析,利用MEGA软件对基因序列进行系统进化树分析。采用pQE30/M15系统对EuCCR进行原核表达,重组质粒成功表达分子量约36 kD的目的蛋白。本研究从尾叶桉GLU4中克隆得到EuCCR基因并原核表达,为该基因的酶学分析以及利用该基因转化调控尾叶桉木质素合成奠定基础。  相似文献   

阿月浑子中酚类物质提取方法与气相色谱-质谱分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

富丰珍  冷平生  蒋湘宁  丛者福  魏芳 《华北农学报》2007,22(Z1)

用不同的提取方法对阿月浑子叶酚类物质的定性分析进行了研究,通过比较确定用氢氧化钠水溶液提取阿月浑子叶中的酚类物质效果最佳,经硅烷化后用气质联仪进行定性分析,并与标准样品的气相色谱-质谱图对照,可得到阿月浑子叶中含儿茶素,没食子酸,香豆酸,邻苯二酚和邻苯三酚.  相似文献   

大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白的研究   总被引：14，自引：2，他引：14  

陆海  吴薇  曾庆银  李义  蒋湘宁  王沙生 《北京林业大学学报》2001,23(6):1-4

为了研究在大肠杆菌BL2 1(DE3)中重组蛋白的表达特点 ,探讨重组蛋白在大肠杆菌中表达时可溶性蛋白与包涵体出现的特点 ,从表达载体中表达了植物ACC合成酶 .经SDS PAGE电泳与双波长扫描分析 ,确定目的蛋白随表达时间、菌液密度的增加而增加 .但是其最佳表达时间为 2 5h ,菌液密度OD6 0 0 为 0 6 ,IPTG的最佳浓度为 0 6mmol L ,此时目的蛋白含量占全菌蛋白含量之比最高 .植物ACC合成酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在 ,未能检测到可溶性蛋白的表达  相似文献   

植物雌激素槲皮素对非洲爪蟾生长和骨骼发育的影响     

丛琳  秦占芬  蒋湘宁  周景明  杨蕾  徐晓白 《勤云标准版测试》2005,(6)

用两栖动物非洲爪蟾作模型动物,来揭示植物雌激素槲皮素对非洲爪蟾生长和骨骼发育的影响。非洲爪蟾从46/47期开始,分别暴露50μg/L,100μg/L,200μg/L槲皮素,直至变态后1个月。结果表明槲皮素处理一方面促进蝌蚪体重的增加,另一方面导致尾的畸形。200μg/L槲皮素还导致脊柱的畸形,表现为少一块脊椎骨。  相似文献   

盐胁迫对刺槐不同组织及细胞离子吸收和分配的变化   总被引：12，自引：1，他引：12  

王艳青  蒋湘宁  李悦  周晓阳  曾端香  周金池 《北京林业大学学报》2001,23(1):18-23

该文从器官水平和细胞水平对盐胁迫后的刺槐苗离子含量进行分析 ,比较了不同组织膜透性和盐离子在刺槐组织及细胞中的分配特点 .研究表明 :随胁迫时间的延长 ,叶片细胞膜系统受到的伤害比根部细胞膜系统大 .根部的Na+含量较高 ,其分布量的顺序是根 >茎 >叶 ,叶片中盐离子含量较低 ,从而减少了盐胁迫对地上部的毒害 ;K+的含量则与Na+相反 ,其分布量的顺序为 :叶 >茎 >根 ,幼嫩的组织中分布较多 ,以保证植物正常的代谢活动 .刺槐根皮层细胞的液泡中积累Na+和Cl-的量远高于细胞质 ,说明刺槐的根皮层细胞对Na+和Cl-具有一定的区隔化作用 .刺槐叶肉细胞的细胞壁、细胞质和液泡中Na+和Cl-的含量没有明显差别 .测定结果表明 ,器官水平与细胞水平耐盐机制具有一致性  相似文献   

烟草木质素合成途径几个中间代谢物HPLC分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

陶霞娟  赵艳玲  陈雪梅  王天华  蒋湘宁 《北京林业大学学报》2005,27(5):111-114

该文建立了烟草木质素生物合成途径几个中间代谢物咖啡酸（CA）、4 香豆酸（PA）和阿魏酸（FA）的RP-HPLC分析方法.用ODS-C18色谱柱分离、紫外波长扫描检测器检测，并确定320 nm为最佳检测波长；Ｖ（甲醇）∶V(水)（含1.5％乙酸）为20∶80，是最理想的流动相.该方法对CA、PA和FA的回收率分别为95.59%、93.67%、97.32%，相关系数（R[[sup]]2[[/sup]]）分别为0.994 6、0.994 6、0.994 5，满足定量分析要求.经测定，发现转基因烟草CA、PA和FA含量分别为未转化烟草的2.6～3.0、3.4～4.1和7.1～8.2倍.   相似文献   

一种改进的双色SDS-PAGE凝胶和可视化上样电泳方法   总被引：1，自引：0，他引：1  

盖颖  王文棋  蒋湘宁 《北京林业大学学报》2006,28(1):103-106

SDS-PAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段．由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较困难．该文介绍1种在浓缩胶中添加颜色染料,使浓缩胶显现颜色,以此可视化区分浓缩胶中点样孔（井）位置的方法,可以准确而高效完成点样操作,使传统的SDS-PAGE点样过程通过折光性来判断变为可视化准确判断,提高点样效率和电泳质量．   相似文献   

杨树肉桂醇脱氢酶基因序列和表达模式分析及CAD4酶活性检测     

任珊珊  赵艳玲  白华  蒋湘宁  盖颖 《华中农业大学学报》2011,30(5):578-584

应用生物信息学方法从杨树基因组数据库中筛选出19个杨树肉桂醇脱氢酶基因,它们聚为3类.序列分析表明,杨树CAD基因家族主要通过全基因组加倍和串联复制的方式进行扩张.杨树和拟南芥CAD家族共6对旁系同源基因,在较强的净化选择压力下进化.19个基因在杨树不同组织中均有表达,表达量较高的是PoptrCAD17、PoptrCA...  相似文献   

美国红枫外植体选择及启动培养研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

李莹  罗晓芳  蒋湘宁 《黑龙江农业科学》2010,(8):6-9

对美国红枫组织培养中外植体灭菌、褐化预防及外植体启动进行了试验研究。结果表明:以美国红枫半木质化茎段为外植体,用1%次氯酸钠灭菌4 min,外植体的成活率最高为82.22%;在外植体培养初期每隔2 d转移至新鲜培养基中,2~3次后可以彻底去除褐化现象;最佳的启动培养基为MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1,外植体抽芽率可达92.2%。  相似文献   

毛白杨4CL-like基因的克隆与原核表达分析     

曹山  饶国栋  魏弘宜  蒋湘宁  陆海 《广东农业科学》2013,40(9):140-142

为得到毛白杨4CL-like基因并对其原核表达特性进行分析,利用毛白杨叶片的总RNA反转录得到的总cDNA为模板,利用PCR技术克隆得到毛白杨4CL-like基因(登录号:XP_002315339.1).利用MEGA软件对4CL-like基因及其他9个来自不同物种的4CL基因进行进化树分析.最后通过构建pET30-4CL-like原核表达载体对该基因进行原核表达分析.结果显示,克隆得到的4CL-like基因CDS区全长为1 758 bp,编码585个氨基酸.系统进化分析表明,该基因与葡萄中的4CL-like5有很高的同源性.另外,SDS-PAGE分析表明,4CL-like基因在大肠杆菌BL21中成功表达,所表达融合蛋白的分子量约为60 ku.  相似文献