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试验选择某腹泻暴发场(母猪规模13 000头),通过检测门卫室、转猪车轮胎、水源、产床、鞋底等区域棉拭子中PEDV载量,查找到猪场生物安全上容易存在的漏洞(产房消毒不彻底、鞋底携带病毒、转猪车轮胎消毒不彻底、工作人员窜场导致感染范围扩大、工作人员清洗体表不彻底等),通过荧光定量全面评估猪场环境中PEDV载量,查找生物安全漏洞,建立健全的生物安全体系的评估机制。结果表明,经过1个月的整改,最终该猪场环境中PEDV载量急剧下降,阳性率由整改前的100%(8/8)降低为整改后的21.43%(3/14),从而帮助该猪场降低环境PEDV载毒量,并建立完善的PEDV防控的生物安全体系。 相似文献
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目的：为猪场实验室提供科学的非洲猪瘟病毒核酸诊断试剂盒选择方案。方法：选择4种非洲猪瘟核酸检测试剂盒,通过对比梯度稀释后标准物质的线性扩增、对低含量时（20 copies/μL）的敏感性、对以纯水为样本时假阳性检出率。结果：线性扩增试验中,A试剂盒对20 copies/μL浓度的标准品检测率为100%（3/3）,其他试剂盒对该浓度下的标准品,均未达到100%;低含量敏感性试验中,A试剂盒阳性检出率为91.67%（44/48）,其他厂家试剂盒的检出率分别为85.42%（41/48）、79.17%（38/48）、58.33%（28/48）;假阳性试验中,A和B未出现阳性反应,而C、D试剂盒分别出现2、1个非特异性反应。结论：经过性能比较,A试剂盒更符合猪场实验室对于高敏感性和低假阳性的要求。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是猪的肠道传染病病原,主要引起仔猪呕吐、腹泻和脱水,对一周龄内的哺乳仔猪危害最为严重,死亡率可达50%~100%。利用Vero86细胞从湖北某猪场腹泻仔猪小肠病料中分离到一株病毒,经RT-PCR检测、序列比对后确定其为PEDV,命名为HB201503株。设计PEDV s1基因的全长扩增引物,获得该株病毒的s1基因全长序列并进行了进化分析,结果表明该毒株与近年来在Gen Bank登陆的PEDV s1基因核苷酸序列相似性在91.4%~99.2%,与疫苗株CV777相似性较低,仅为91.8%。通过s1基因进化树分析表明HB201503以及近几年国内分离毒株主要集中在第I个亚群,且HB201503株与KM406183(2014,四川)和KM609206(2015,江苏)同源性较高。此外,s1蛋白氨基酸序列比对显示,HB201503与近几年分离毒株及疫苗株CV777均在55-74、157-163位氨基酸出现了连续4个以上氨基酸的缺失或替换,而且HB201503株与CV777及近几年分离毒株相比,还在270-283位氨基酸上出现了1个氨基酸的缺失和10个氨基酸的替换。 相似文献
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为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定。结果表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%; BHK21细胞密度在70%～80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3; Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku; IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光。说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白。 相似文献
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为了探究日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机理和研制以JEV复制复合体为靶标的药物,试验以GenBank中收录的JEV HW1株基因序列为模板,设计针对NS5rdrp的特异性引物,提取JEV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板使用PCR方法克隆得到NS5rdrp基因片段;利用T4DNA连接酶构建重组质粒pcDNA3.1-NS5rdrp,并对产物测序;提取去除内毒素的重组质粒,用转染试剂X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent转染BHK21细胞,转染24 h后观察结果;最后利用Western-blot技术检测NS5rarp蛋白的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小约为920 bp的NS5rdrp基因片段;测序结果经NCBI上BLAST比对分析,克隆得到的NS5rdrp基因与HW1株的同源性为100%;转染时细胞的最佳密度区间为70%～80%,转染试剂与转染质粒的比例为3∶1;经过Western-blot检测,重组质粒在细胞内正常表达,NS5rdrp蛋白的分子质量约为37 ku。说明试验通过真核表达成功获得NS5rdrp蛋白。 相似文献
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