鹅副黏病毒HN基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果     

夏铭崎  王淳玉  许洪洁  胡桂学 《吉林农业大学学报》2008,30(2):204-207

以大量提取的鹅副黏病毒(GPMV)HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN和空载体pVAXⅠ肌肉注射BALB/c小鼠。利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,用ELISA方法检测小鼠血清中GPMV抗体,观察GPMV HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN在小鼠中的免疫效果。结果表明:试验组小鼠血清中GPMV特异性抗体水平显著高于对照组,ELISA试验结果OD492值分别为1.360 0±0.101 7和0.358 0±0.018 1;试验组与对照组的淋巴细胞增殖试验刺激指数(SI)差异不显著,其SI值分别为1.181 2±0.030 1和1.119 1±0.035 5。由此说明,GPMV HN基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫。  相似文献   

鹅细小病毒VP3基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

高光  张鑫  徐佳  王淳玉  许洪洁  胡桂学 《中国兽医学报》2010,30(3)

根据已发表的鹅细小病毒(GPV)B株核苷酸序列,设计并合成了1对引物,PCR扩增GPV吉林分离株主要结构蛋白VP3基因,获得大小为1605bp的核苷酸片段。将该片段纯化后克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌JM109,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。经过酶切和连接反应,将VP3基因克隆入真核表达载体pVAX1,转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,提取质粒,进行了PCR和酶切鉴定。通过脂质体法将pVAX1-VP3转染Vero细胞,RT-PCR和间接免疫荧光法检测。结果显示,VP3基因克隆成功,与GPVB株核苷酸序列同源性为96.2%;PCR和酶切鉴定结果证实,成功构建了含VP3基因的GPV真核表达载体pVAX1-VP3。提取转染该质粒的Vero细胞RNA,RT-PCR扩增,在1000～2000bp可见一明显DNA条带;间接荧光抗体染色转染细胞,在细胞表面可见特异荧光。  相似文献   

小鹅瘟病毒VP3基因真核表达质粒在小鼠中的免疫效果   总被引：1，自引：0，他引：1  

许洪洁  张鑫  夏铭琦  胡桂学 《中国兽药杂志》2008,42(1):5-8

检测小鹅瘟病毒（GPV）VP3基因真核表达质粒在小鼠中的免疫效果。大量提取本实验室已构建的含有GPVVP3基因的真核表达质粒pVAXI／VP3和空载体pVAXI,分两组进行两点肌肉注射免疫小鼠,共免疫4次。利用MTY法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,间接ELISA法检测免疫小鼠血清中GPV特异性抗体的水平。淋巴细胞增殖指数,免疫小鼠与正常小鼠差异不显著。间接ELISA检测结果表明,pVAXI／VP3质粒免疫组小鼠血清中GPV特异性抗体水平,显著高于空载体对照组和阴性对照组。已构建的GPVVP3基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫,为小鹅瘟核酸疫苗的研究奠定基础。  相似文献