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IBV-SD04(以下简称SD04株)为一株临床分离的鸡肾型传染性支气管炎病毒.通过RT-PCR技术扩增出该毒株的M基因片段,并将其克隆到pMD-18T载体中进行序列测定与分析,结果表明该分离株M基因长度为678 bp,编码225个氨基酸,与国内外主要的疫苗毒株和国内分离株核苷酸同源性为86.6%~99.9%;通过DNAStar软件对M蛋白进行二级结构预测,结果表明M蛋白的N端前98位氨基酸具有良好的亲水性、抗原性指数以及表面可能性;通过在线软件TMHMM Server v.2.0对M蛋白进行跨膜区分析,结果显示SD04株M蛋白跨膜3次,跨膜区分别位于23 ~40、47~69和79~98肽段区;应用在线软件NetNGlyc 1.0和NetOGlyc 3.1对M蛋白进行糖基化位点分析,结果表明SD04株M蛋白无氧连糖基化位点,存在2个氮连糖基化位点.综合以上信息,SD04株可作为疫苗候选株进行研究. 相似文献
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为建立猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗的大规模生产工艺,本研究应用工作体积为l00 L的激流灌注式生物反应器培养Marc-145细胞,接种PRRS病毒R98株(PRRSV-R98),进行病毒培养,结果显示,培养6d细胞数量可增殖5倍~7倍,单次病毒收获量相当于3 000个~5 000个10L转瓶,而且培养的PRRSV-R98各项指标均符合规程要求.本研究在国内首次建立了应用100 L激流灌注式生物反应器制备PRRS活疫苗的生产工艺,为规模化培养工艺的推广与使用提供了技术参数. 相似文献
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为优化仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗生产工艺,对细菌生长曲线、耐热保护剂和冻干曲线进行了研究,建立了发酵体积1%、2%和3%的二级种子接种量下分别发酵12 h~20 h的细菌生长曲线,检测3个配苗比例、4种耐热保护剂和3条冻干曲线下成品疫苗的冻干菌存率、活菌存活率和安全性,确定了接种3%二级种子液发酵培养17 h为最佳发酵培养条件,发酵菌数达到428×108CFU/m L;最佳配苗比例为菌液︰耐热保护剂1∶1(V∶V),优化保护剂B作为最佳耐热保护剂,设定冻干程序3#作为最佳冻干曲线。基于此,仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗抗原含量达到40头份/瓶,冻干菌存率和活菌存活率均达到95%以上,大幅度降低了猪体免疫副反应,极大提升了疫苗的产品品质。 相似文献
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根据猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)2种病原体的基因保守序列,分别设计并合成了与PRv的gp50基因序列和PPV的VP2基因互补的两对引物,进行单相PCR,分别扩增出预期的217bp片段及158bp片段;同时,用这两对引物对混合的样品中的PRV和PPV的DNA模板进行二联PCP扩增及二联PCR反应条件的优化,结果得到2争与试验设计相符的217bp(PRV)和158bp(PPV)特异性务带:敏感性检测结果表明,对PRv的检测可以达到10^6.11/20μL TCID50对PPV的检测可以达到0.008HA单位的核酸模板。本文建立的PCR方法,可以在24h内对样品进行快速检测,可作为PRV、PPV感染和临床样品检测的可靠手段。 相似文献