乳酸菌素PlnJ第5位氨基酸(赖氨酸)定点突变对其热稳定性的影响     

严梦涵  许丽惠  游泽龙  陆芍华  何晴  郑娱  许高琳  王全溪 《福建农林大学学报(自然科学版)》2023,(4):546-553

利用生物信息学软件I-Mutant2.0分析植物乳酸菌素PlnJ的氨基酸序列,筛选出最不稳定的氨基酸位点,进行定点突变,构建点突变重组表达质粒。对点突变重组表达质粒进行原核表达,并筛选表达最适条件;采用镍亲和层析法纯化重组蛋白。以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌,探究100℃水浴加热0、5、15、30 min对重组PlnJ抑菌功能的影响。结果表明,PlnJ第3位氨基酸——赖氨酸(AAG)对其稳定性具有重大影响。以人工合成第5位氨基酸,即赖氨酸(AAG)突变为缬氨酸(GTG)的PlnJ核苷酸序列作为模板,成功构建重组表达质粒,PCR和酶切鉴定结果显示目的条带184 bp,测序后证明突变成功。重组蛋白诱导表达条件的优化结果表明：在37℃、12 h、0.8 mmol·L^-1IPTG的最优诱导条件下,特异目的蛋白表达显著(27.5 ku);咪唑洗脱液浓度280 mmol·L^-1是最优洗脱条件,可获得较为单一的目的蛋白。采用牛津杯抑菌试验法及麦氏比浊法比较突变前后的PlnJ蛋白的抑菌效果,结果表明,突变后的蛋白[PlnJ(G5)]与突变前的...  相似文献   

番鸭肝细胞外泌体miRNA表达谱的研究     

赖妤婕  郑娱  游泽龙  魏祥端  许高琳  许丽惠  王全溪 《中国家禽》2023,(3):24-29

为探究育雏阶段番鸭肝脏中外泌体携带miRNA的种类及其涉及的功能，试验采集3周龄雏番鸭肝脏制备原代肝细胞，培养3 d，离心取上清，试剂盒法分离肝细胞外泌体，电子显微镜观察外泌体形态和粒径，免疫印迹法检测外泌体CD81蛋白表达丰度。提取外泌体总RNA,miRNA测序后进行注释、GO和KEGG功能富集分析。结果显示：雏番鸭肝细胞外泌体为直径30～100 nm的囊泡小体，呈“杯托”状；标志性蛋白CD81免疫印迹结果呈阳性表达；miRNA测序共获得了59个新注释miRNA,GO功能富集结果主要涉及单有机体过程、刺激应答、多细胞有机体过程、定位、细胞器、胞外区绑定分子功能等；KGEE功能富集结果显示主要涉及淀粉和蔗糖代谢、MAPK信号通路、氨基糖和核苷酸糖代谢、肌醇磷酸代谢和磷脂酰肌醇信号传导系统等通路。研究表明番鸭肝脏外泌中的miRNA种类丰富，涉及多种生理功能。  相似文献