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重组GP5AB蛋白间接ELISA检测PRRSV抗体方法的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。抗原最适包被浓度为2μg/mL,最佳封闭液为0.15%BSA,37℃封闭2 h后,再4℃封闭24 h,血清最适稀释度为1∶200,其作用时间为60m in,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为90 m in,37℃显色10 m in,S/P≥0.284为阳性,S/P≤0.26为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准。该抗原与猪其他4种临床症状类似的疾病的阳性血清反应呈阴性。批内和批间重复性试验结果,变异系数均小于7%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用本方法初步检测了一些疫苗免疫仔猪血清样品,并与重组N蛋白和PRRSV抗原同时进行比较,结果显示3种抗原检测的结果基本一致。 相似文献
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在分析脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位基础上人工合成一段含VP1抗原表位双链DNA序列（150bp），克隆于原核表达载体pGEX-6p-1，经酶切鉴定后转化大肠杆菌（E.coli）BL21感受态细胞，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达融合蛋白。经过GSTrap FF亲和层析柱获得纯化蛋白，经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量为30800。以该纯化蛋白免疫家兔，获得效价分别为1：25600和1：1600的抗血清。Western—blot结果显示该融合蛋白与经过空载体pGEX-6p-1表达的GST蛋白孵育的抗血清反应后有明显的特异性条带。结果表明：脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位区150bp编码基因在E.coli中获得正确表达，纯化后的蛋白具有抗原性。 相似文献
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韩国农业机械化促进法 总被引：2，自引：0，他引：2
韩国历来重视农业立法，以《农业基本法》为农业宪法，同时配之以制定了１００多部农业法律，已形成了较完善的农业法律体系。其中，《农业机械化促进法》是韩国有关立足农业发展的专门法律之一，它的制定与施行有力地促进了韩国农业的机械化和现代化。一、颁布《农业机械化促进法》的背景自从２０世纪６０年代开始推进国民经济跨越式发展战略以来，韩国经济发展迅速，但由于韩国推行“重工轻农”政策，所以产业结构失衡，给农业、农村和农民带来了不少问题。１．农业经营规模零散化韩国于１９４９年６月制定的《土地改革法》规定，自耕农土… 相似文献
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在分析脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位基础上人工合成一段含VP1抗原表位双链DNA序列(150 bp),克隆于原核表达载体pGEX-6p-1,经酶切鉴定后转化大肠杆菌(E coli)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.经过GSTrap FF亲和层析柱获得纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量为30800.以该纯化蛋白免疫家兔,获得效价分别为1:25 600和1:1600的抗血清.Westem-blot结果显示该融合蛋白与经过空载体pGEX-6p-1表达的GST蛋白孵育的抗血清反应后有明显的特异性条带.结果表明:脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位区150 bp编码基因在E.coli中获得正确表达,纯化后的蛋白具有抗原性. 相似文献
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为了确定猪生殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白A、B抗原表位之间的相互关系和对免疫的影响，应用PCR方法扩增出A、B抗原表位基因并分别克隆于原核和真核表达载体中。原核重组质粒表达的重组蛋白经Western blotting检测证明，该重组蛋白具有良好的抗原性。将重组蛋白和真核表达质粒免疫小鼠，前者可诱导产生针对PRRSV的特异性ELISA抗体，但是此抗体没有中和活性；后者不能诱导免疫小鼠产生PRRSV特异性抗体。结果表明，中和抗体的产生不但与A、B表位的空间构象有很大的关系，如果蛋白质分子质量过小也不能诱导机体产生有效的免疫反应。 相似文献
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猪脑心肌炎病毒重组抗原间接ELISA诊断方法的建立与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
以猪脑心肌炎病毒VP1重组蛋白为抗原,建立了检测猪脑心肌炎病毒(EMCV)血清抗体的间接ELISA诊断方法。经优化后抗原最适包被浓度为2μg/mL,血清最适稀释度为1∶50,其作用时间为90 min,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为30 min。判定标准为OD450≥0.427为阳性,OD450≤0.35为阴性,介于二者之间为可疑。该重组蛋白与PRRSV、猪瘟、PCV2、FMDV抗体反应呈阴性,证明具有良好的特异性。应用该方法检测了来自我国不同地区的26家猪场的156份临床血清,结果证明我国部分规模化猪场已有猪脑心肌炎疾病存在。 相似文献
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为研究棚膜对草莓早熟丰产的影响，本文比较了5种不同材质、不同品牌棚膜覆盖下的温室气温、地温和相对湿度。结果显示，在温度采集的全时段均是尼奥科特PO膜温度最高，同一时间段，尼奥科特PO膜处理的温室平均气温、地温分别高出其他处理2.48、2℃，同时尼奥科特PO膜处理的温室平均相对湿度最低，鑫丰PO膜平均相对湿度最高，两者相差2.96个百分点。结果表明，尼奥科特PO膜昼夜温度优于其它处理，累计积温效果好，有利于草莓生长；同时棚内相对湿度也较低，可减少病害发生，有利于草莓的早熟丰产。 相似文献
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