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【目的】从小麦隐性核雄性不育突变体ms1与十倍体长穗偃麦草异附加系中,克隆雄性育性恢复基因ThMs1,解析该基因的表达模式、编码蛋白的生物化学活性和生物学功能,鉴定新的小麦ms1育性恢复基因,从而更好地应用于小麦杂交育种。【方法】通过基因组原位杂交（genomic in situ hybridization,GISH）,鉴定ms1与十倍体长穗偃麦草异附加系中小麦外源的染色体类型;通过同源克隆法在小麦-十倍体长穗偃麦草异附加系中克隆雄性育性基因ThMs1,并稳定转化小麦ms1进行基因功能互补验证;利用RT-PCR及实时荧光定量PCR分析检测基因的表达模式;进一步通过RNA原位杂交分析基因的组织细胞特异性表达特性;利用特异性抗体进行Western blot检测ThMs1蛋白在体内的表达情况;经SignalP软件分析预测蛋白结构;通过蛋白-脂质结合活性分析检测ThMs1蛋白是否具有脂类分子结合活性。【结果】证实小麦ms1与十倍体长穗偃麦草异附加系细胞中含有偃麦草4Ag染色体;从小麦-十倍体长穗偃麦草异附加系中克隆了雄性育性基因ThMs1,遗传转化功能互补试验证实ThMs1能够完全恢复小麦ms1突变体的雄性不育表型,基因的聚类分析表明MS1只存在于禾本科植物中;通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测发现ThMs1在减数分裂期的花药中特异表达,RNA原位杂交分析证实ThMs1在小麦小孢子发生过程中特异表达;Western blot检测发现ThMs1在小麦减数分裂期的花药中表达;对ThMs1蛋白氨基酸序列进行结构预测发现,该蛋白具有推测的脂类结合分子结构域,ThMs1蛋白脂类分子结合试验表明ThMs1蛋白特异结合磷脂酸和磷酸化的磷脂酰肌醇。【结论】克隆了一个新的来自十倍体长穗偃麦草、可恢复小麦隐性核雄性不育突变体ms1雄性育性的ThMs1,该基因与小麦Ms1具有相似的分子结构、时空表达模式和脂结合活性,导致2个蛋白在小麦中也具有相似的生物学功能,ThMs1可以替代普通小麦Ms1的功能调控小麦花粉育性,该结果为利用小麦ms1通过分子设计建立小麦杂交育种体系（新一代杂交育种体系）提供了一个新的育性恢复基因。 相似文献
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以玉米为材料，研究了效应剂和ＰＨ对绿色和黄化玉米ＰＥＰ羧化酶活性的协同作用，发现绿苗和黄化苗中ＰＥＰ羧化酶对效应剂的敏感性不同，前者比后者Ｇ６０、Ｇｌｙ敏感，而后者比前者对Ｍａｌ敏感。黄化苗３ｈ光处理后，其ＰＥＰ羧化酶对Ｇ６Ｐ对敏感性与绿苗趋于相同。同时发现ＰＨ不同，ＰＥＰ羧化酶对效应剂的敏感性也不同，低ＰＨ比高ＰＨ时酶对效应剂更敏感。根据绿苗和黄化苗ＰＥＰ羧化酶活性和对效应剂敏感性的差异推测黄化 相似文献
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低温和NaCl对玉米叶片离体PEPCase活性及其调节特性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
对玉米叶片磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPCase)的低温失活现象的研究结果表明,低温贮存期间,玉米叶片离体PEPCase活性随贮存时间的延长而明显降低.对效应剂G6p、Gly和2.4—D的敏感性也减弱.甘油对低温贮存期间酶的活性和对2.4—D的敏感性均有保护效应;G6p单独存在时对酶的活性和2.4—D的敏感性均无保护效应,但同一浓度的G6p在与Gly和甘油同时作用时对酶的活性和2.4—D的敏感性均有保护效应,其保护程度优于同浓度的甘油.NaCl对PEP-Case活性有抑制作用.对酶对效应剂的敏感性影响较小.对低温贮存期间酶的活性和对效应剂的敏感性均无保护效应,并能加速酶的低温失活和对效应剂敏感性的减弱.上述试剂对低温贮存期间酶对效应剂敏感性的保护程度与对其活性的保护程度相一致,表明低温贮存期间酶对效应剂敏感性减弱与其低温失活有直接关系. 相似文献
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