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[目的]建立华山松SSR-PCR最佳反应体系,为华山松种质资源的分子标记辅助育种、遗传多样性分析及遗传图谱构建研究提供理论参考.[方法]以华山松幼嫩针叶为材料,分别采用试剂盒法、SDS法和改良CTAB法提取华山松基因组DNA,确定华山松DNA最佳的提取方法.通过L16(44)正交试验设计对华山松SSR-PCR反应体系中引物用量(A)、dNTP用量(B)、Taq DNA聚合酶用量(C)和DNA模板用量(D)进行优化,获得华山松SSR-PCR最佳反应体系.[结果]改良CTAB法提取的基因组DNA浓度为92.1~1786.3 ng/μL,OD260/OD280为1.80~2.07,OD260/OD230比值约2.0,条带明亮且清晰,无弥散现象,表明该方法提取效果最佳.正交试验极差分析结果显示,4个因素影响华山松SSR-PCR反应体系扩增效果的主次顺序为A>D>B>C,最优水平组合为A4B2C2D2.正交试验方差分析结果显示,4个因素影响华山松SSR-PCR反应体系扩增效果的主次顺序为A>D>C>B,最优水平组合为A4D2C2B2.结合正交试验16个组合的评分结果,最终确定华山松SSR-PCR最佳反应体系(20.00μL):10μmol/L引物0.35μL,50 ng/μL DNA模板1.00μL,10 mmol/L dNTP 2.00μL,5 U/μL Taq DNA聚合酶1.20μL,10×PCR Buffer(含Mg2+15 mmol/L)2.00μL,用ddH2O补足至20.00μL.[结论]优化获得的华山松SSR-PCR最佳反应体系可应用于华山松种质资源评价及分子标记辅助育种等研究. 相似文献
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为了研究西藏青稞抗旱的分子机制,以西藏耐旱青稞(Hordeum vulgare L.var.nudum HK.f.)品种喜玛拉雅10号为材料,利用抑制性差减杂交技术(SSH)构建青稞苗期叶片干旱胁迫诱导基因表达的正向差减文库。挑取600个阳性克隆进行PCR验证,并对验证后的单克隆进行测序分析,共获得420个有效序列。去除冗余序列和嵌合序列后,获得220条高质量EST序列,其中183条singlets,37条contigs。BlastN分析表明,其中189个EST序列可以在GenBank的unigene中找到同源序列,31个未能找到unigene同源序列;BlastX分析表明,62个EST序列unigene与未知功能蛋白或假定蛋白有较高的相似性;158条EST序列与已知功能蛋白有较高的同源性。获得的EST序列多数不仅与植物的非生物胁迫相关,也与植物的生物胁迫反应相关,说明植物在胁迫反应中有明显的共同机制。其中与大麦表达序列高度同源的EST占58%;这些基因涉及参与信号转导和转录调节的基因(11.96%),编码保护、防御和胁迫耐受蛋白的基因(9.78%),跨膜转运相关基因(5.43%),光合作用基因(6.52%),参与结构和功能代谢合成途径中的一些酶(30.43%)等代谢过程。实验结果表明,青稞在干旱复水条件下可诱导一系列特异基因的表达,如参与抗旱反应相关酶和蛋白基因锌指蛋白、衰老相关蛋白、CAS、细胞色素P450、热激蛋白、胁迫诱导蛋白,以及LEA蛋白、脱水蛋白、P5CS等保护蛋白基因。用KOBAS系统将56个EST定位到32个Pathways中,初步分析发现,谷氨酸盐代谢途径(Glutamate metabolism)、精氨酸和脯氨酸代谢途径(Arginine and proline metabolism)、泛素蛋白介导的蛋白质水解代谢(Ubiquitin mediated proteolysis)途径可能与青稞抗旱相关性较大。 相似文献
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基层作为生产运行、成本控制、安全环保的基本单元,是企业全部工作和竞争力的基础。基础不牢,地动山摇。必须把基层建设作为根本大计,持之以恒,稳步推进,持续深入。一、以加强班子和党支部建设为核心,进一步增强基层的战斗力队伍好不好,关键在带。班子和支部坚强有力,思想上讲团结进取,工作上有思路方法,就能赢得员工的广泛支持,整个队伍就有主心骨。 相似文献
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神经肽Y与动物的肥胖 总被引：1，自引：0，他引：1
神经肽Y是一种由36个氨基酸残基组成的单链多肽,它具有广泛的生理功能,涉及食欲、体重、性行为、生殖功能、能量平衡、神经内分泌功能、心脏血管功能、记忆的保持等调节过程.特别是它具有很强的促进食欲作用,是导致动物肥胖的重要原因之一.本文着重讨论NPY与动物肥胖的关系. 相似文献
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茶园土壤环境条件与茶叶质量密切相关。但目前对茶园土壤环境条件的调查研究依旧不足，为了解安溪县铁观音茶园土壤环境条件，进一步促进茶叶质量提升，本研究对福建省安溪县6个铁观音主产乡镇（感德、祥华、西坪、龙涓、剑斗、桃舟）共52个茶园土壤样品进行测定，并对pH值、有机质、碱解氮、有效磷、速效钾，污染源（镉、铅、汞、砷、铬、铜）等指标进行分析。结果表明，安溪县铁观音主产区茶园土壤pH平均值为4.27，呈酸性；有机质含量丰富，平均值达到24.00g.kg-1，各乡镇土壤有机质均处于Ⅰ级水平；碱解氮平均值为85.85mg.kg-1，龙涓乡处于Ⅰ级水平，其他乡镇处于Ⅱ级水平；有效磷含量较高，平均值为44.42mg.kg-1，均处于Ⅰ级水平；速效钾含量平均值为73.22mg.kg-1，龙涓乡及西坪镇处于Ⅱ级水平，其他乡镇处于Ⅲ级水平；污染源（镉、铅、汞、砷、铬、铜）平均含量低于茶叶产地环境技术条件和有机茶产地环境条件中的相应限值。安溪县铁观音主产区茶园土壤养分水平总体较高，但土壤存在一定程度酸化，速效钾含量相对匮乏，可通过施用土壤改良剂等缓解土壤酸化，施用钾肥补充土壤速效钾含量；土壤环境质量优良，适宜... 相似文献
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