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对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30(+)连接构建重组表达质粒Flic-pQE30,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli XL1-Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1 485 bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56 kDa。经SDS-PAGE分析表明,以37℃、1 mM的IPTG诱导5 h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56 kDa的融合蛋白。经western-blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白Flic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。 相似文献
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试验对多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)基因进行克隆、鉴定,并在原核系统中表达。以多杀性巴氏杆菌(CVCC448)强毒株基因组为模板,扩增OmpH基因,连接T载体,经测序鉴定正确后与表达载体pET-28a连接构建重组表达质粒OmpH-pET28a,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli BL21菌株内,抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导,表达产物通过镍离子亲和层析纯化,之后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显示,OmpH基因的编码区为978 bp,编码326 个氨基酸残基,融合蛋白分子质量约为37 ku。Western blotting检测结果显示,表达的重组蛋白OmpH可与鼠抗多杀性巴氏杆菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。多杀性巴氏杆菌OmpH基因的成功表达,为进一步研究其免疫作用奠定了基础。 相似文献
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对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30（＋）连接构建重组表达质粒Flic—pQE30,将此重组质粒转化人表达宿主E．coliXLI—Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以1PTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS—PAGE和Westernblot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1485bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56kDa。经SDS—PAGE分析表明,以37℃、1mM的IPTG诱导5h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56kDa的融合蛋白。经western—blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白nic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。 相似文献
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为客观评价对地方黑羽鸡实施净化管理的效果。该研究对2500只同批次1日龄白城地方黑羽雏鸡以禽白血病和鸡白痢为净化病种筛选鸡群,进而各选取250只母鸡和25只公鸡分别组建净化组与非净化组,试验探究其在死淘、产蛋性能、种蛋孵化及后代生长性能等方面的差异。结果显示,非净化鸡群的死淘率、料蛋比分别比净化组高出2.6和0.49个百分点;非净化组6~11月龄间月均产蛋率及其种蛋在合格率、受精率、出雏率和健雏率分别较净化组低出6.82、3.28、3.27、8.37和4.13个百分点;同时,与非净化组相比,净化组后代的平均日增重也有所提高。可见,通过净化鸡群禽白血病和鸡白痢,可显著提高地方黑羽鸡的生产性能和繁殖性能,增加经济效益。 相似文献
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