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为分析绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）膜表面脂蛋白p60的免疫学特性,本研究分别扩增p60蛋白N端与C端的基因,并通过重叠延伸PCR将C端基因序列中的TGA（1 459－1 461 bp）定点突变为同义密码子TGG。将扩增的基因片段分别插入到pET-32a（+）表达载体上,重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,得到分子质量约57 ku的p60-N蛋白和分子质量约为30.5 ku的p60-C蛋白;再对纯化后的重组蛋白进行 Western blotting 分析,结果表明重组蛋白均可与MO阳性血清发生特异性免疫学反应,表明表达的重组蛋白p60-N和p60-C均有良好的反应原性。本研究为筛选MO主要的免疫原性蛋白和建立特异的血清学诊断方法提供了依据。 相似文献
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为研究分子伴侣是否可以促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性,应用原核表达和Western blot方法进行检测,结果表明:1)牛支原体一个膜蛋白M1的截短片段在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式表达,改变诱导时间、温度以及诱导剂浓度均未改变其表达形式;2)将4种分子伴侣pGKJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf16分别与含有目的蛋白的重组质粒在表达工程菌(BL21)中共表达,当加入终浓度为1.0mmol/L IPTG以及0.5mg/mL L-阿拉伯糖或5.0ng/mL四环素的诱导剂,37℃诱导5h,发现分子伴侣pGTf2和pG-KJE8能显著提高M1截短片段的可溶性表达,其他2种分子伴侣未改变M1的表达形式;3)可溶性表达的M1截短片段与牛支原体阳性血清可以发生特异性反应。因此,研究发现2种分子伴侣可以使牛支原体膜蛋白在大肠杆菌表达系统中以可溶性形式表达,但未改变其生物活性,该研究结果可为建立牛支原体有效的血清学诊断方法及亚单位疫苗的研制奠定基础。 相似文献
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