双丙氨磷在橡胶树遗传转化中的应用     

谢黎黎  安泽伟  姜泽海  李雅超  翟琪麟  黄华孙 《分子植物育种》2013,(4):545-550

本研究以GV3101::pMP90RK为工程菌株,bar基因作为筛选标记基因,研究了双丙氨磷在橡胶树根癌农杆菌介导法转基因体系中对转基因愈伤组织的筛选效果,并利用该体系将橡胶树转录因子HbWRKY5转入橡胶树无性系热研8-79中。实验结果表明,3mg/L双丙氨磷可作为橡胶树转基因体系中抗性愈伤组织筛选的最佳浓度。本研究中共获得了3个抗性愈伤组织系,抗性愈伤经过体细胞胚发生共获得234个体细胞胚,经植株再生培养后共获得22株再生植株。对再生植株进行的PCR鉴定结果表明,所获得的再生植株均为转基因植株。因此,bar基因结合双丙氨磷的筛选体系可以作为橡胶树转化体系中的有效筛选体系。  相似文献   

橡胶树HbWRKY3的克隆及其响应逆境胁迫的表达分析     

谢黎黎  安泽伟  李雅超  翟琪麟  程汉  方家林  黄华孙 《热带作物学报》2013,34(8):1463-1472

通过RACE技术扩增获得橡胶树HbWRKY3基因,并对该基因及其所编码氨基酸序列进行生物信息学分析和响应逆境胁迫的表达分析,结果表明：该基因含有2个WRKYGQK结构域和2个C2H2锌指结构,属于WRKY基因家族第Ⅰ类;由4个外显子和3个内含子组成,DNA序列全长3 780 bp;开放阅读框长度为2 211 bp,编码由737个氨基酸组成的多肽。该基因定位于细胞核中,在橡胶树叶片、树皮、花、胶乳等不同组织中都有表达,以花中的表达水平最高。盐、PEG、茉莉酸、水杨酸等非生物胁迫均可诱导HbWRKY3的表达,但干旱、ABA、乙烯和低温胁迫的诱导较为明显。  相似文献   

EMS诱导巴西橡胶树花药次生体细胞胚突变方法初探     

陈祖兴  赵建文  翟琪麟  李维国 《热带农业科学》2012,32(2):32-35

以巴西橡胶树热研7-33-97未成熟花药次生体细胞胚为材料,采用化学诱变剂EMS(甲基磺酸乙酯)诱变处理,设置4个浓度(0%、0.1%、0.3%、0.5%)、4个处理时间(2、4、6、8 h)共16个处理组合,以"半致死剂量"为选择标准,确定了巴西橡胶树热研7-33-97未成熟花药次生体细胞胚的适应诱导组合为EMS浓度0.5%,处理时间4 h。  相似文献   

橡胶树5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶基因的克隆及其响应非生物胁迫的表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

李雅超  安泽伟  谢黎黎  翟琪麟  黄华孙 《热带作物学报》2013,34(5):807-814

5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPs)是植物合成芳香族氨基酸的一个重要酶,与许多抗逆相关的次生代谢物的合成有关.本研究利用RACE技术从橡胶树热研7-33-97中获得了全长为2025 bp的HbEPSPS基因cDNA序列,开放阅读框为1572 bp,编码523个氨基酸;使用ProtParam tool预测该基因编码的蛋白质分子量为56.01u,等电点(pI)为7.91.该基因由8个外显子和7个内含子构成,全长4600 bp.实时荧光定量PCR结果表明,HbEPSPS基因在橡胶树叶片、皮、花、胶乳和胚中均表达,其中以叶片中的表达量为最高.激素、干旱、盐和低温等非生物胁迫都能诱导HbEPSPS基因表达量上调,其中茉莉酸甲酯、乙烯和PEG的上调作用最为显著.橡胶树HbEPSPS基因的克隆及其在非生物胁迫下的表达调控研究将为橡胶树抗逆相关的研究提供理论依据.  相似文献   

橡胶树MSAP技术体系的优化与建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李海林  李维国  陈组兴  赵建文  翟琪麟 《热带作物学报》2011,32(4):644-647

通过对酶切反应最少酶用量及选择性扩增体系的优化,建立了橡胶树MSAP最佳反应体系。研究结果表明,500 ng橡胶树叶片基因组DNA,用EcoRⅠ、HpaⅡ和MspⅠ各0.5 U,在37℃酶切4 h,即可完全酶切。优化的选择性扩增体系为:Mg2+1.5 mmol/L、dNTPs 250μmol/L、引物0.15μmol/L、Taq DNA聚合酶1 U;使用该体系,可获得清晰稳定的橡胶树MSAP图谱。  相似文献   

应用EST-SSR分析国外种质作为亲本在中国橡胶树杂交育种中的贡献     

赵建文  张晓飞  翟琪麟  李维国 《热带作物学报》2013,34(2):232-238

利用57对EST-SSR引物分析了21份国外引进品种和67份中国自育品种的遗传多样性.旨在从基因组水平阐明国外种质与中国自育橡胶树品种的遗传关系,揭示国外优异种质对我国橡胶树育种的遗传贡献.结果表明,57个EST-SSR位点共检测到265个等位基因,国外引进品种和中国自育品种的平均等位基因数分别为3.7018和4.3509.国外品种中检测到16个特有等位基因,而中国自育品种中检测到53个.综合系谱分析、聚类分析和PCO分析发现,PR107、RRIM600、GT1和PB86等作为杂交亲本,在中国橡胶树杂交育种中发挥着重要作用,但同时遗传基础狭窄也是制约我国橡胶树育种的重要因素.  相似文献