斜带石斑鱼生长激素基因重组蛋白的发酵     

吕晴霁  潘忠超  石和荣  杨慧荣  王树启  赵会宏 《水产科学》2017,(1):88-93

将含有石斑鱼生长激素基因的毕赤酵母X33进行震荡培养后,装入≥50L的自控罐中,28~30.5℃、pH 5.5~6.0、溶解氧≥30mg/L条件下发酵84h,生产石斑鱼生长激素基因重组蛋白。发酵期间,通过甲醇诱导毕赤酵母获得目的蛋白的高效表达,最后通过Western Blot和SDS-PAGE聚丙酰胺凝胶电泳对目的蛋白进行定性定量检测。最终获得目的蛋白表达量约为1.5~2.0g/L,约占胞外可溶性总蛋白的16.4%。本试验用自控罐发酵生产含有斜带石斑鱼生长激素基因重组蛋白的毕赤酵母生产工艺,为实现工业化生产鱼类生长激素饵料添加剂奠定基础。  相似文献   

Dmrt 基因在斜带石斑鱼胚胎发育不同阶段的表达分析     

胡娟  林芳妹  吕晴霁  王庆  杨慧荣  石和荣  赵会宏 《广东农业科学》2019,46(3):119-126

【目的】对斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）胚胎发育过程及 Dmrts 基因在此过程的表达情况进 行研究,为以后深入研究 Dmrts 基因在石斑鱼中的功能提供基础。【方法】用自然产卵方式取得受精卵在室内 恒温（24±0.5℃）、静水中孵化,在盐度 31.0 的海水中培育,整个胚胎发育过程历时约 29 h 50 min,之后进入 胚后发育阶段。利用光学显微镜观察斜带石斑鱼胚胎发育过程,分别取分裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、 器官形成期、初孵仔鱼期的胚胎保存于 RNAlater 中且每组 5 个平行。【结果】通过荧光定量分析 Dmrt 在不同 胚胎发育时期的相对表达量,结果表明,斜带石斑鱼 Dmrt 基因在胚胎发育过程中,都从卵裂期开始表达。其 中 Ecdmrt1（E. coioides Dmrt1）基因在囊胚期表达水平达到峰值,卵裂期和初孵仔鱼期表达量较低,Ecdmrt1 基 因在囊胚期表达是分裂期的 5.4 倍。Ecdmrt2（E. coioides Dmrt2） 基因在胚胎初期相对表达量比较平稳,而在神 经胚期表达量显著上升,是分裂期的 9.2 倍;Ecdmrt2 基因在初孵仔鱼中表达水平最高,是分裂期的 17.6 倍。 Ecdmrt2b 基因在胚胎发育过程中表达量逐渐增加,在器官形成期表达量达到峰值（P ＜ 0.05）,在初孵仔鱼中 表达水平又下降。Ecdmrt3（E. coioides Dmrt3）基因在胚胎发育初期表达量相对较低,在器官形成期表达量显著 上升,是分裂期 7.1 倍,在初孵仔鱼中表达量达到峰值。【结论】Ecdmrt 基因在胚胎发育过程中均从卵裂期开 始表达,且可能参与胚胎的组织器官发育及仔鱼发育生长。  相似文献