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为克隆犬弓首蛔虫Toxocara canis,T.canis卵黄原蛋白DUF1943结构域(The domain of unknown function1943,DUF1943)(Tc-duf1943),构建其原核表达载体pET-28a(+)/duf1943,并检测重组蛋白在大肠杆菌Escherichia coli,E.coli中的表达形式.该文根据T.canis的转录组数据,以T.canis雌、雄虫cDNA为模板扩增Tcduf1943,然后与表达载体pET-28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,对目的蛋白的原核表达形式和蛋白质纯化进行鉴定.结果显示Tc-duf1943序列长度为864bp,含有一个完整的开放阅读框,编码288个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量大小约为3.5×10~4;对表达条件进行优化后,以0.4mmol/L IPTG,于37℃诱导4h时可获得大量目的蛋白;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白.该试验成功构建了pET-28a(+)/duf1943原核表达载体,为进一步研究TcDUF1943的生物学功能奠定了基础. 相似文献
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非洲猪瘟是近年来在我国生猪养殖领域出现的新型疫病,其发病过程短,死亡率高,对养殖行业造成了严重破坏。对非洲猪瘟疫情分布、传播途径、防控措施进行分析和讨论,希望具有借鉴意义。 相似文献
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为了解渝西地区黄鳝胃瘤线虫分离株线粒体细胞色素C氧化酶第I亚基(cox1)的遗传变异情况及与其他科线虫的种群遗传关系,本研究对该地区黄鳝胃瘤线虫cox1部分序列进行了克隆测序和进化分析.结果表明渝西地区6株胃瘤线虫分离株的cox1序列长度一致,均为441bp;各分离株之间的相似性为97.5%~100%.种系发育树表明,6个胃瘤线虫分离株均位于同一分枝.由于胃瘤线虫cox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的标记.本研究结果为胃瘤线虫的分类鉴定以及进一步的分子流行病学调查和群体遗传研究奠定了基础. 相似文献
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为对犬弓首蛔虫(T.canis)免疫抑制卵巢信息蛋白(Tc-iom)、卵黄原蛋白(Tc-vit)、酪氨酸蛋白激酶(Tctpk)和丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(Tc-stp)四个性别相关基因进行差异表达分析。本研究采用SYBR Green I qRT-PCR方法检测Tc-vit、Tc-iom、Tc-tpk、Tc-stp在T.canis雌虫卵巢、输卵管、子宫和雄虫精巢、贮精囊、输精管的转录情况。结果显示,Tc-vit在雌虫卵巢、输卵管和子宫中均有转录,在雄虫精巢和贮精囊中也有转录,但在输精管中无转录;Tc-iom在雌虫卵巢、输卵管和子宫中高水平转录,在雄虫精巢和贮精囊中转录量较低,输精管中无转录;Tc-tpk在雄虫精巢和贮精囊中的转录明显高于其他生殖组织;Tc-stp在雄虫精巢和输精管中转录量较高,在雌虫卵巢、输卵管和子宫中转录量较低。本试验为T.canis性别相关基因的进一步研究奠定了基础。 相似文献
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