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卵泡发育是家禽繁殖性能的关键因素,其中,对卵泡发育有关键作用的细胞为卵巢颗粒细胞。本试验旨在探究高邮鸭卵巢颗粒细胞最优分离培养方法,建立高邮鸭颗粒细胞综合鉴定体系。选取产蛋期高邮鸭母鸭排卵前卵泡,探究不同消化温度、消化酶组、消化时长对颗粒细胞分离与培养的影响,筛选出最优消化方案;体外培养24 h观察不同处理组细胞生长状态及形态特征,并结合HE染色确定颗粒细胞形态,FSHR、LHR间接免疫荧光检测颗粒细胞特征蛋白表达,qRT-PCR检测特异性基因FSHR和LHR表达,以综合确定分离培养的鸭颗粒细胞特异性。结果发现,4℃、1 mg/mLⅡ型胶原酶+0.25%胰蛋白酶、9 min消化处理后获得的鸭卵巢颗粒细胞活率最佳,贴壁率最高,培养效果最优;选择贴壁效果良好的细胞进行HE染色,显微镜观察下细胞染色均匀,内有颗粒状物质,细胞呈现多角形,单个细胞具有多个伪足;FSHR、LHR间接免疫荧光检测表明,>90%细胞呈双阳性。同时,qPCR结果表明,在颗粒细胞内有FSHR、LHR基因表达。 相似文献
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为进一步丰富番鸭羽色性状遗传机制的研究，运用Illumina高通量测序技术对不同性别的黑羽及白羽番鸭皮肤组织进行转录组测序，经GO富集分析和KEGG通路注释对差异表达基因功能进行解析，利用qRT-PCR对部分RNA-Seq数据进行验证。结果显示，公黑羽番鸭皮肤（HFPF.G）vs母黑羽番鸭皮肤（HFPF.M）获得差异基因2 131个，公白羽番鸭皮肤（BFPF.G）vs母白羽番鸭皮肤（BFPF.M）获得差异基因780个，黑羽番鸭皮肤（HFPF）vs白羽番鸭皮肤（BFPF）获得差异基因684个，通过上述三组韦恩分析，以黑、白羽番鸭皮肤对比组（HFPF vs BFPF）504个差异基因为番鸭羽色候选基因，进一步筛选获得番鸭羽色性状相关前10个差异表达，其溶质转运蛋白（Solute carrier,SLC）家族成员SLC7A11和SLC25A4可能对番鸭黑、白羽色性状遗传起重要调控作用。同时发现细胞色素P450对外源物质的代谢作用信号通路、谷胱甘肽代谢信号通路、cAMP信号通路等可能参与番鸭黑白羽色性状遗传的调控过程。研究表明，SLC7A11和SLC25A4可用于黑羽番鸭的羽毛分子辅助选育。 相似文献
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