先导编辑在鸡胚成纤维细胞系中的效率研究     

高翔  韩瑞莹  张喆  伍钊涛  唐非台  王晓丽  唐小川 《中国家禽》2023,(12):1-8

为探究先导编辑在鸡细胞系中的基因编辑效率，研究通过点突变和重组连接的方式构建先导编辑的表达质粒，使用在线软件设计并化学合成靶向OVM、MSTN和NHE1基因的先导编辑引导RNA(pegRNA)质粒，脂质体转染上述质粒至鸡胚成纤维细胞系（DF-1）中并进行药物筛选，PCR产物TA克隆测序检测并统计各位点的编辑效率。结果显示：测序和PCR鉴定结果表明先导编辑表达质粒构建成功；DF-1中OVM基因经先导编辑后成功产生错义突变，其中精确编辑效率为41.10%、错误插入与缺失（indel）效率为6.67%，均显著优于对照组的常规基因编辑（P<0.05）;MSTN基因的先导编辑精确编辑效率为10.24%、indel效率为13.57%,NHE1基因的先导编辑精确编辑效率为24.88%、indel效率为7.18%。结果验证了先导编辑在鸡细胞系中的有效性和普适性，为其进一步应用于基因编辑鸡的制备奠定基础。  相似文献