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【目的】 在毕赤酵母中构建猫血清白蛋白（feline serum albumin,FSA）表达系统,并探索其最适的基本表达条件,为FSA的生产提供一种新方法。【方法】 在GenBank上获取FSA碱基序列,进行密码子优化并合成,将优化的密码子构建到载体pPIC9K上,经PCR和双酶切验证后通过电击转化将重组质粒FSA-pPIC9K转化毕赤酵母GS115,依次经MD平板和G418筛选后进行菌落PCR获得阳性菌株,随机选取阳性菌株经甲醇诱导表达96 h后,取表达上清液进行Western blotting验证。选取表达量较高的菌株分别在不同温度（24、26、28和30 ℃）、pH （4.0、5.0、6.0、7.0和8.0）和甲醇诱导量（其中1组为每24 h添加0.5%,其余4组为每12 h分别添加0.5%、1.0%、1.5%和2.0%）的条件下诱导表达96 h,取表达上清液进行Western blotting验证。【结果】 菌落PCR结果显示,获得2条大小分别约为2.3和2.2 kb的目的基因条带和毕赤酵母AOX1基因扩增条带,诱导表达96 h后取表达上清液进行Western blotting验证,在70 ku左右出现特异性条带。通过基本条件优化发现该蛋白在28 ℃,pH为6.0且每12 h添加0.5%的甲醇条件下表达量较高。【结论】 毕赤酵母GS115可稳定表达FSA。 相似文献
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【目的】探究犬脐带间充质干细胞(UC-MSCs)联合滑车沟再造术对髌骨脱位治疗的效果。【方法】将20只髌骨脱位患犬随机分为干细胞治疗组和常规手术组,每组10只。手术当天,干细胞治疗组关节腔注射0.5 mL UC-MSCs(106/kg)混悬液,常规手术组注入等量生理盐水,通过收集患犬基础信息、回访跟踪记录,检测血常规和血液因子含量以及影像学等方法评估犬UC-MSCs的治疗效果。【结果】与常规手术组对比,术后第1、7天干细胞治疗组白细胞介素-6(IL-6)含量极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05),两组间转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞总数、中性粒细胞总数均无显著差异(P>0.05)。术后第30天数字X线摄影复查结果显示,干细胞治疗组关节腔清晰,骨损位置有明显的软骨及骨组织生长,无再次脱出和关节炎等并发症。常规手术组的骨损伤处骨生长情况缓慢,2例患犬髌骨再次脱位(2/10)。【结论】滑车沟再造术后,在常规术后护理(使用抗炎、抗菌和止疼药物)条件下,关节腔内注射UC-... 相似文献
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