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试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L-1,16 ℃,220 r·min-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-ChPrnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。 相似文献
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随着食用菌生产规模的不断扩大,对木屑需求越来越多,有限的木屑资源难以承受以木屑为栽培主料的生产形式所产生的压力。这一问题得不到缓解,势必对食用菌产业发展造成一定影响。为了更经济、有效地利用木屑资源,本文在分析食用菌营养生理的基础上,提出两项改进意见;(1)木屑培养料配方中,木屑量的50%-70%可用玉米芯、豆秆粉等农作物秸秆代替;(2)木屑污染料经过退发酵、补充营养、常压灭菌后可以再利用,以减少木屑浪费。 相似文献