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为分析蓝舌病Ⅰ型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2 mmol/L、温度为25℃、诱导6 h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。 相似文献
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为分析蓝舌病I型病毒（BTV-1）VP5蛋白的免疫原性，本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21（DE3），然后进行IPTG诱导表达，以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示，重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa，与预期结果一致。进一步优化条件，发现IPTG为0.2 mmol/L、温度为25 ℃、诱导6 h时，重组蛋白在上清中表达量最高，通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40 μg/只和20 μg/只免疫Balb/c小鼠，同时设置PBS为阴性对照，对三免后血清进行间接ELISA检测，发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测，发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应，说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性，这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。 相似文献
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