猪CD163基因的克隆及截短原核表达     

刘雪晴  张可  唐青海  薛姣雄  隆泽桧  高翠翠  刘之睿  苏荣  唐斯萍 《湖南畜牧兽医》2023,(2):30-36

（目的）研究旨在克隆猪CD163 (pCD163)基因、体外表达CD163蛋白。（方法）采用RT-PCR扩增猪CD163基因，运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列，将猪CD163的两个截短基因片段（1-1749 bp和1717-3348 bp）克隆至原核表达载体pGEX-4T-1，构建重组原核表达载体，转化Transetta(DE3)菌株，IPTG诱导蛋白表达，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。（结果）结果表明，pCD163开放阅读框为3348 bp(GenBank:OM321546)，编码1116 aa，蛋白分子量为120.5 kDa，该基因与已经测定的人、绿猴、牛、狼的CD163的核苷酸相似性依次为87.8%、88%、87.4%和88%,pCD163基因与抹香鲸和牛的CD163基因亲缘关系最近，与人、狼和绿猴的亲缘关系相对较近；pCD163截短片段1-1749蛋白分子量为92 kDa，截短片段1717-3348蛋白分子量为85 kDa，均以包涵体形式表达。（结论）试验成功克隆了pCD163基因，两个截短基因片段在原核细胞中均以包涵体形式表达，为后...  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白的原核表达与纯化     

刘之睿  黄嘉瑶  苏荣  陈濛濛  彭春婷  唐青海  唐斯萍 《湖南畜牧兽医》2023,(5):30-36

为制备高致病性的TGEV毒株重组S蛋白,试验将重组质粒pET28a-TGEV-S2、pET28a-TGEV-S3,转化至E. coli BL21(DE3)表达菌株,设置不同的诱导温度、IPTG浓度和诱导时长对其进行表达条件的优化,并使用纯化试剂盒将其纯化,采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果表明,重组TGEV毒株S蛋白的分子量分别约为28 kDa、30 kDa,在不同诱导条件下均以包涵体形式存在,在28℃条件下以终浓度为1 mmoL·L^-1 IPTG诱导4 h表达量达到最高。结果表明:试验成功制备了TGEV重组S蛋白,为TGEV抗体检测试剂盒和基因工程疫苗、检测试剂的研究奠定了基础。  相似文献