奶牛生物钟基因BMAL1真核表达载体的构建及生物信息学分析     

徐皓东  王逸群  刘祖培  李丹  张海森  李雅婷  江海圳  靳亚平  陈华涛 《中国畜牧杂志》2023,(4):161-167

本研究旨在克隆奶牛脑肌类芳香烃受体核转位蛋白1基因（Brain and Muscle Arnt-Like Protein 1,BMAL1）的蛋白编码序列（Coding Sequence,CDS）并构建其真核表达载体,运用生物信息学方法解析其CDS序列和编码蛋白特性。以牛肝脏组织为材料,利用PCR技术扩增奶牛BMAL1基因中带有同源臂的CDS片段。采用同源重组法,将目的片段连接至酶切线性化的pc DNA3.1-Puro-N-3HA真核表达载体上,酶切及测序结果均符合预期的质粒命名为pc DNA3.1-3HA-c BMAL1。将空载与重组质粒分别转染至HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR技术（q PCR）和Western Blotting技术检验奶牛BMAL1基因的过表达效果,并利用生物信息学软件分析BMAL1基因CDS区及其编码蛋白的特性和功能。结果显示,pc DNA3.1-3HA-c BMAL1真核表达载体构建成功,将该质粒转染至HEK293T细胞后,成功实现了BMAL1在m RNA和蛋白水平的过表达;牛BAML1基因与绵羊、山羊同源性最高,BMAL1蛋白为不稳定蛋白,其上不存在...  相似文献   

南方大口鲶早繁苗种培育技术     

赖文安  陈显友  刘祖培 《淡水渔业》1999,29(4):29-31

我们在１９９７年３月下旬进行了南方大口鲶早繁技术的研究并获得成功后，于１９９７年４月和１９９８年４月连续进行了该鱼种早繁苗种培育技术的研究，以期探索出一整套早繁苗种培育的成熟技术，不断提高南方大口鲶苗种繁育水平。１培育池条件１１人工控温培育池：共１...  相似文献   

南方大口鲶早繁技术研究初报   总被引：1，自引：0，他引：1  

赖文安  陈显友  刘祖培 《淡水渔业》1998,28(4):33-4

南方大口鲶早繁技术研究初报＊赖文安陈显友（四川省绵阳市水产站,绵阳６２１０００）刘祖培（绵阳市特种水产苗种繁育场,四川安县６２２６５１）南方大口鲶又称河鲶,鲶巴朗,分布于长江以南的大江河中,是一种主要以鱼为食的大型经济鱼类。由于其肉质细嫩,味道鲜美,...  相似文献   

奶牛NR1D1基因的真核表达载体构建、表达谱及其在卵巢组织的定位     

王逸群  刘祖培  李雅婷  张海森  李丹  靳亚平  陈华涛 《畜牧兽医学报》2023,54(1):133-145

旨在克隆奶牛核受体亚家族1 D组成员1(nuclear receptor subfamily 1 group D member 1,NR1D1)基因的蛋白编码序列(coding sequence, CDS),构建其真核表达载体，预测分析NR1D1基因的生物学功能，并检测该基因的组织表达谱及其在卵巢组织的表达分布。本研究以5头健康的24月龄雌性奶牛为试验动物，PCR扩增带有同源臂的奶牛NR1D1基因CDS区全长片段，利用同源重组法将目的片段连接至线性化的pcDNA3.1-Puro-N-3HA空载体，构建重组质粒，利用酶切、PCR及测序对重组质粒进行鉴定。结合质粒测序结果，利用生物信息学软件预测分析该基因的生物学功能。将鉴定正确的质粒转染至HEK293T细胞，利用实时荧光定量PCR(qPCR)与Western blotting技术检测NR1D1基因在mRNA与蛋白水平的表达。此外，利用qPCR检测奶牛NR1D1基因的组织表达谱，并利用免疫组织化学技术检测NR1D1蛋白在奶牛卵巢组织的表达分布。结果，成功获得带有同源臂的奶牛NR1D1基因的CDS区全长片段(1 884 bp),酶切、PCR及...  相似文献