安氏隐孢子虫COWP部分编码基因的表达及免疫原性     

任文陟  郑君  宫鹏涛  李建华  李明英  刘颖丽  张西臣 《中国兽医学报》2010,30(10)

依据NCBI中安氏隐孢子虫囊壁蛋白(COWP)编码基因设计特异性引物,提取安氏隐孢子虫长春株总RNA,RT-PCR扩增目的基因AF,构建重组原核表达载体pET28a-AF,通过大肠杆菌BL21诱导表达,产物经SDS-PAGE以及Western blotting鉴定。然后纯化重组蛋白,通过免疫BALB/c小鼠进行体液免疫和细胞免疫水平的检测。结果显示,重组原核表达质粒pET28a-AF构建成功,Western blotting显示重组蛋白约为18 000,可被安氏隐孢子虫免疫小鼠的多克隆抗体和HRP标记的抗组氨酸抗体识别。重组蛋白免疫BALB/c小鼠的抗体水平差异显著(P0.05),与对照组相比,CD4+的值差异极显著(P0.01),而CD8+的值差异显著(P0.05)。结果表明,成功克隆并表达了重组安氏隐孢子虫囊壁蛋白,纯化的重组蛋白具有一定的免疫原性。  相似文献   

毛竹cab-PhE11基因的克隆与序列分析     

刘颖丽  高志民  彭镇华 《河北农业大学学报》2008,31(5)

采用RT-PCR技术和RACE-PCR技术,从毛竹(Phyllostachys edulis)中分离了捕光叶绿素a/b结合蛋白基因cDNA编码区全长,命名为cab-PhE11(GenBank登记号:EU327783)。该基因全长1154 bp,编码区cDNA全长753 bp,编码250个氨基酸。生物信息学分析表明,在cab-PhE11编码的蛋白第62~239位包括典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域,还包含1个N-糖基化位点、1个酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点、5个N-肉豆蔻酸化位点以及1个丙氨酸富集区。序列相似性分析结果表明,cab-PhE11编码的氨基酸序列与玉米、绿豆、拟南芥、烟草等的cab基因有较高的相似性,都在80%以上,该基因属于lhcb6类基因。  相似文献   

杨树油菜素内酯合成基因DET2的克隆与功能分析          下载免费PDF全文

李泽华  杜娟  贺学娇  赵树堂  刘颖丽  卢孟柱 《林业科学研究》2020,33(2):85-92

[目的]DET2基因编码一个5α-还原酶,是油菜素内酯(BRs)合成过程中的关键限速基因。研究DET2基因在杨树生长发育中的作用,对于进一步研究油菜素内酯在木本植物中的调控机制有重要意义。[方法]从银腺杨84K(Populus alba×P. glandulosa,‘84K’)克隆得到拟南芥AtDET2同源基因PagDET2,利用生物信息学对其进行序列比对、生化特征分析、构建系统发育进化树。通过RT-PCR分析其在杨树中的表达模式。构建由CaMV 35S强启动子驱动的过表达载体,通过农杆菌介导的叶盘转化法转化84K杨,得到PagDET2-OE转基因植株。分析过表达DET2基因对于转基因植株内源BRs含量、植株生长和抗逆的影响。[结果]克隆了包含全长编码区PagDET2基因全长,可编码一个长度为257个氨基酸的蛋白质。其蛋白序列与毛果杨、拟南芥、水稻、棉花、大豆、番茄DET2蛋白同源性较高,说明该基因在进化过程中相对保守。PagDET2在84K杨不同组织中均检测到表达,其在茎中的表达较高。通过ELISA检测植物BRs含量发现,过量表达DET2可以显著提高杨树内源BRs含量。过量表达DET2基因,可以导致转基因植株的高生长,但对盐胁迫更加敏感。[结论]DET2基因作为BRs合成的关键基因,在杨树中过量表达可以显著提高内源BRs含量,促进植株增高。DET2转基因植株的获得为进一步分析BR参与木本植物生长发育的调控机制奠定了基础。  相似文献   

竹子光合作用研究进展   总被引：5，自引：0，他引：5  

高健  刘颖丽  李岚  蔡春菊  李雪平  彭镇华 《世界竹藤通讯》2006,4(3):13-16

介绍了在竹子光合作用方面已进行过研究的主要竹种；总结了已研究竹种光合作用的规律和基本特征，分别阐述了不同生长环境和生理生态因子对竹种光合作用的影响；介绍和讨论了植物光合作用研究的最新手段、方法和趋势；提出了竹子光合作用研究的新思路。着重阐述了竹子光合作用进一步深入研究的首要内容及应采取的研究方法，展望了竹子光合作用研究的蛋白组学方法和功能基因组学方法，以及应用于生产实践的前景。  相似文献   

安氏隐孢子虫囊壁蛋白编码基因的克隆及原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑君  李建华  张西臣  宫鹏涛  李明英  刘颖丽 《中国预防兽医学报》2010,32(11)

为克隆和原核表达安氏隐孢子虫囊壁蛋白(COWP)的部分编码基因(AB),本研究根据COWP基因序列设计引物,RT-PCR扩增目的基因AB,从而构建重组原核表达质粒pET-AB。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE以及western blot鉴定。回收并纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,检测细胞免疫和体液免疫水平。SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白约为16 ku,可以被HRP标记的抗组氨酸抗体和安氏隐孢子虫免疫的小鼠血清识别。经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠抗体水平以及CD4+和CD8+的值均差异显著(p0.05),表明获得的重组蛋白具有一定的免疫原性。  相似文献   

蛋白质组学概况及在植物中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘颖丽  杜克久  裴东 《河北林果研究》2006,21(3):262-265

蛋白质组学是后基因组时代的新兴领域,本文简要介绍了其研究内容和方法,特别介绍了蛋白质组学的关键技术———双向凝胶电泳和质谱,概括了蛋白质组学在草本及木本植物中的主要研究进展,展望了植物蛋白质组学的发展前景。  相似文献   

鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC-2基因真核表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达     

刘颖丽  李建华  郑君  张西臣 《中国兽医学报》2011,31(8)

根据GenBank发表EtMIC-2序列设计1对特异性引物,通过PCR技术扩增EtMIC-2基因,将该基因与真核表达载体pVAX1连接,构建了重组真核表达载体pVAX1-EtMIC-2,并用脂质体介导法将其转染Hela细胞。然后通过间接免疫荧光（IFA）、SDS-PAGE和Western-blot分析检测EtMIC-2蛋白在转染细胞中的表达情况。经测序和序列分析,成功扩增获得了EtMIC-2基因,并成功构建了重组真核表达载体pVAX1-EtMIC-2,Western-blot和IFA表明EtMIC-2蛋白在Hela细胞中得到表达。该结果为柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗的研究奠定基础。  相似文献   

毛竹捕光叶绿素a/b结合蛋白基因cab-PhE1的克隆与表达分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

高志民  刘成  刘颖丽  彭镇华 《林业科学》2009,45(3)

光合作用是地球上生命现象的基础,高等植物光合作用光能的捕获与传递主要是通过捕光色素蛋白复合体(LHC Ⅰ,LHCⅡ)来完成的,其中LHCⅡ是绿色植物叶绿体类囊体中含量最丰富的一种天线蛋白(孙钦秒等,2000a).  相似文献   

一个绿竹MADS-box基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

高志民  刘颖丽  李雪平  彭镇华 《分子植物育种》2007,5(6):866-870

MADS-box基因编码的转录因子在植物花器官发育过程中起着重要作用.采用RT-PCR技术,从绿竹(Bambusa oldhamii L.)中分离到一个MADS-box基因,命名为BOMADS1(GenBank登记号:EF517293).BOMADS1编码区cDNA全长723 bp;编码区共编码240个氨基酸,具有典型的植物MADS-box基因结构,其编码肽链包含了MADS区、K区、Ⅰ区和C末端.序列分析结果表明,BOMADS1编码的蛋白与其它植物的MADS-box蛋白有着较高的一致性,其中与石刁柏(Asparagus officinalis L.)的AOM3高达87%.系统进化树分析表明BOMADS1基因属于E类功能基因.  相似文献