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为了筛选草鱼肝细胞脂肪变性的最佳诱导剂及浓度,并初步分析脂肪乳剂(lipid emulsions,LE)引起草鱼肝细胞脂肪变性的作用机理,以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)正常肝细胞为研究对象,建立草鱼脂肪变性肝细胞模型,以含10%胎牛血清的基础培养液为对照组,处理组为含20%脂肪乳剂0.5~2 m L/L和含20%、50%胎牛血清的诱导培养液,孵育草鱼肝细胞48 h后,定量分析肝细胞内的甘油三酯(TG)含量,观察脂滴积聚情况及肝细胞超微结构的变化,检测细胞培养上清中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)的活性,q RT-PCR技术检测脂代谢关键基因(PPAR?、PPAR?、SREBP-1c、LPL、Lep和UCP2)的转录水平变化,蛋白质印迹技术检测PPAR?、SREBP-1c的蛋白水平变化。结果发现,含1~2 m L/L LE的诱导液组和含20%、50%FBS的诱导液组与对照组相比TG含量均显著上升(P0.05),且20%FBS和各浓度LE诱导组的转氨酶活性与对照组相比差异不显著(P0.05),表明含1~2 m L/L LE的诱导液和含20%FBS的诱导液均可建立草鱼营养性脂肪肝细胞模型。在肝细胞脂变模型中,PPARγ和LPL等脂代谢基因的表达量显著升高(P0.05),而Lep基因表达量显著降低(P0.05),PPARγ和SREBP-1c的蛋白水平升高。结论认为:采用1~2 m L/L LE和20%的FBS均可以在短时间内建立草鱼肝细胞脂肪变性模型,含1 m L/L LE的诱导液诱导效果最佳;肝细胞内脂质的蓄积可能与脂肪代谢关键基因PPARγ、SREBP-1c、LPL及Lep等密切相关。 相似文献
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云南伊洛瓦底江外来种麦穗鱼的形态差异分析 总被引:2,自引:0,他引:2
对采自伊洛瓦底江水系和顺、猴桥、龙陵和盈江4个群体共120尾麦穗鱼标本进行11个常规性状和16个框架结构性状的测量,应用多变量形态度量学结合主成分分析和差异系数分析方法比较各群体间的形态差异。结果表明,4个群体间没有显著性差异。其中,主成分PC1、PC2和PC3贡献率分别为26.658%,15.281%和11.395%,累积贡献率为53.334%,在PC1、PC2散点图中,龙陵与猴桥群体部分分出。从27个性状变量中筛选出贡献较大的9个性状(P0.01)与体长的比值进行形态差异系数分析,发现龙陵与猴桥、和顺、盈江群体间差异系数均小于1.28,综上分析,伊洛瓦底江4个麦穗鱼地理群体形态差异不显著,这可能与引入时间较短、引入群体来源于同一种群有关。 相似文献
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为探讨长江中下游地区梁子湖和淤泥湖团头鲂脂肪沉积和生长发育规律,采用HE染色观察2个种质资源区团头鲂脂肪和肝脏组织的形态学及脂肪沉积变化,并用qPCR技术检测脂肪和肌肉组织中LEP、LPL、IGF-1和NPY基因表达,初步分析来自2个种质资源区团头鲂在生长和脂肪沉积能力上存在的差异。结果显示,淤泥湖团头鲂的肠系膜脂肪含量是梁子湖的约1.5倍,HE染色发现,梁子湖团头鲂脂肪和肝脏细胞的脂滴直径比淤泥湖的小;但梁子湖团头鲂肌肉及脂肪组织中的LEP mRNA表达量显著高于淤泥湖的,肌肉组织中IGF-1mRNA的表达量也显著高于淤泥湖的,梁子湖团头鲂脂肪组织LPL mRNA表达量和淤泥湖的相比,无显著差异,2个种质资源区团头鲂NPY的mRNA表达在肌肉和脂肪组织中也没有显著性差异。由此推测,组织中体脂沉积能力及相关基因表达存在差异可能是导致梁子湖和淤泥湖团头鲂生长速度不同的主要原因之一。 相似文献
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猪前体脂肪细胞是研究人类肥胖及其相关的糖尿病、高血压等疾病最合适的材料之一,但目前尚未建立猪的前体脂肪细胞系。原代培养的猪前体脂肪细胞生长周期较长,且在常规培养条件下难以长期保存,如能将细胞在超低温条件下保存,使其生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡(薛庆善,200 相似文献
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设计斑马鱼过氧化物酶体增殖物受体γ辅助活化因子-1β(PGC-1β)引物,扩增斑马鱼PGC-1β部分cDNA序列,并进行同源性分析.同时研究饥饿对斑马鱼PGC-1β基因mRNA表达的影响.结果表明:克隆得到斑马鱼PGC-1β部分cDNA序列长度为466bp,获得GenBank序列号为EU433886.同源性分析显示,斑马鱼PGC-1β基因同人、大鼠、小鼠、狗、鸡、金鱼同源性较低,分别为59.4%、57.5%、56.6%、59.0%、53.3%和59.0%.饥饿后,斑马鱼PGC-1βmRNA表达量显著升高.研究表明,PGC-1β在斑马鱼的能量代谢过程中可能发挥重要的作用. 相似文献
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鲤肠道小肽转运载体PepT1多克隆抗体的制备及其组织表达分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为从蛋白水平研究小肽转运载体(PepT1)在鲤(Cyprinus carpio L.)不同组织中的表达及分布规律,本研究采用PCR法获得PepT1 cDNA片段,并转化至大肠杆菌Rosetta,对目标多肽进行原核表达,将Pep T1重组蛋白纯化后免疫新西兰长耳兔(Oryctolagus cuniculus),获取兔抗鲤PepT1多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,免疫组化检测PepT1的组织表达情况,并用荧光实时定量PCR技术检测PepT1转录水平组织表达情况。结果显示,目标多肽分子量约为28 kD;抗体效价达到4×10~5。PepT1在鲤的前肠、中肠、后肠、脾、肝胰脏和肾中均有表达。肠道组织PepT1的高表达与其主要完成食物中肽的吸收功能密切相关,且吸收部位主要集中在前肠和中肠;肾中PepT1免疫染色阳性区域也较为明显,这与肾小管基底膜存在对短肽的重吸收功能相关。此外,肝胰脏和脾PepT1也有一定量的表达,可能与这两个重要器官代谢旺盛有关。本研究制备的兔抗鲤PepT1多克隆抗体能够有效识别鲤各组织中的PepT1蛋白,在后续研究中亦可用于其他鱼类PepT1转运蛋白的表达定位和定量研究。 相似文献