RT-PCR方法快速诊断猪传染性胃肠炎   总被引：7，自引：0，他引：7  

唐丽杰  李一经 《黑龙江畜牧兽医》2001,(12):26-27

根据猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）标准毒株（Purdue-115）的ORF6（N基因）的基因序列，设计俣成了一对引物Li01/Li02用反转录聚俣酶链反应（RT－PCR）技术对发病猪的粪便进行检测。结果得到与预期大小相一致的约1174bp(N基因）的PCR产物，与从参照毒株TGEV TH－98扩增出的片段大小相一致。进一步用限制性内切酶进行分析，发现从发病猪火花名扩增出的N基因与参照毒株TH－98株具有相同的限制性内切酶图谱，从而证实本病例致病病毒为TGEV。  相似文献   

微载体细胞培养技术     

李一经 《黑龙江畜牧兽医》1993,(3)

大规模培养细胞是生产许多重要生物制品的有效方法,但仅依靠扩大培养容器的体积和数量在实际应用中会受到很大限制。而微载体细胞培养技术的应用则是超产量生产细胞的一个突破性进展。其主要原理是,在容器中的细胞悬液中,加入对细胞无毒性的可供细胞贴附的固型微粒(微载体),然后通过适宜的搅拌技术使其保持于悬浮状态,这些小球既小又轻,表面积大,在1ml培养液中5mg的微粒表面积可达30cm~2,这样大大增加了细胞附着的表面积,达到大量培养细胞的目的。  相似文献   

鸡大肠杆菌iss基因的克隆测序及原核表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

樊琛  王亚君  李一经 《中国兽医杂志》2004,40(12):7-10

本实验对鸡大肠杆菌O2血清型菌株进行iss基因克隆测序，并在此基础上设计出两对套式引物，分别对含信号肽Miss基因序列和不含信号肽Miss基因序列进行扩增，并与原核表达载体pGEX-6p-1连接进行原核表达。iss基因克隆测序的结果与两组国外发表Miss基因序列进行比对，其同源性达100％。SDS—PAGE鉴定显示融合蛋白获得了较理想的表达，融合蛋白分子量分别约为36kD和33kD。  相似文献   

肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李丹丹  徐义刚  陈文慧  邱索平  高慎阳  李一经 《中国预防兽医学报》2015,37(7)

为建立肠致病性大肠杆菌(EPEC)的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。  相似文献   

肠道菌群抗病毒机制研究进展     

宫浩阳  吴佳鑫  杨晓钰  解伟纯  王雪莹  李佳璇  姜艳平  崔文  李一经  唐丽杰 《畜牧兽医学报》2023,(12):4910-4919

近年来，由于对肠道中菌群的研究不断深化，同时对肠道菌群和机体健康的关系也有了更加清晰的认识，发现肠道菌群对病毒的感染有着双重调节的作用。肠道菌群可以通过保护肠黏膜屏障以及直接与病毒结合进而中和病毒或者阻止病毒对细胞黏附的直接作用抑制病毒感染，或通过对机体免疫系统建立和发育产生影响的间接方式来抑制病毒的入侵以及分泌具有抗病毒作用的代谢产物来发挥抗病毒作用；此外，益生菌在疾病治疗中的作用也越来越突出，有望从益生菌入手解决当前治疗病毒性疾病的弊端。本文着重对近年来肠道菌群抵抗病毒感染的相关机制研究进展进行综述，并对此方向相关问题及进一步的相关研究进行展望。  相似文献   

两种血清抗性检测方法的比较分析     

徐旺烨  樊琛  李一经 《湖北农业科学》2016,(21):5571-5573

采用流式细胞术法对大肠杆菌的血清抗性进行检测,并与传统涂板法相比较,探讨流式细胞术在血清抗性检测方法中的应用。结果表明,两者呈正相关关系(P=0.0340.05),流式细胞术法可以代替涂板法对大肠杆菌的血清抗性进行检测。该方法可以减少由于涂板不均匀、人工计数等造成的误差,且易操作、计算少、耗时少,数据更准确。  相似文献   

乳酸菌噬菌体的分离及生物学特性鉴定     

秦松跃  赵莉  狄亚心  于晓丽  王丽  唐丽杰  徐义刚  周晗  姜艳平  崔文  李一经  乔薪瑗 《中国畜牧兽医》2021,48(6):2140-2149

为了解乳酸菌噬菌体的生物学特性,并为制定乳酸菌发酵生产过程中噬菌体污染的防控措施提供试验数据和参考,本研究通过斑点试验和双层琼脂平板法,以干酪乳杆菌（L. casei） ATCC 393、戊糖乳杆菌（L. pentosus） KLDS 1.0413、短小乳杆菌（L. brevis） ATCC 367为指示菌从乳制品、泡菜样品中分离乳酸菌噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,噬菌体基因组限制性内切酶作用分析其包装机制,并进行宿主范围和一步生长曲线的测定,SDS-PAGE分析噬菌体结构蛋白,对获得的噬菌体进行生物学特性鉴定。结果显示,分离获得3株烈性乳酸菌噬菌体,依次命名为Lc、Lpen和Lbre。电镜结果显示,噬菌体Lc、Lpen均由多面体头部和非收缩性尾部组成,而噬菌体Lbre由多面体头部和收缩性尾部组成。根据形态学分析,Lc和Lpen属于长尾噬菌体科（Siphoviridae）,B1类,Lbre属于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,A1类。噬菌体基因组经限制性内切酶作用后,核酸电泳结果显示,噬菌体Lc、Lpen基因组均为异质平末端,其包装机制属满头包装,即pac-型,而Lbre含有黏性末端,其包装机制属于cos-型。宿主范围测定结果显示,噬菌体Lc、Lbre对宿主专一,而Lpen宿主谱较广。一步生长曲线显示,噬菌体Lc、Lpen和Lbre潜伏期分别为60、45和150 min,裂解期分别为45、90和105 min,裂解量分别为47、24和30 PFU/cell。SDS-PAGE分析显示,噬菌体Lc结构蛋白有7个,主要结构蛋白分子质量约为50 ku;噬菌体Lpen和Lbre结构蛋白均有5个,主要结构蛋白分子质量分别约为55和50 ku。综上,本研究分离获得3株乳酸菌烈性噬菌体,并对其主要生物学特性进行鉴定,对了解乳酸菌噬菌体及后续乳酸菌噬菌体污染的防治提供了试验数据和理论依据。  相似文献   

鸭瘟的病原、临床表现与防控措施     

崔杨  李一经 《养殖技术顾问》2016,(4):94

鸭瘟也叫作鸭病毒性肠炎,还可称为大头瘟,是一种急性、热性、败血性传染病,主要是鸭、鹅以及多种雁形目的动物容易发生。该病具有较高的致死率,对养鸭业发展造成严重危害。本文组要对该病的病原、流行病学、临床症状进行分析,并介绍疫苗免疫和发病后的处理措施,供大家参考。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒微载体培养试验研究     

刘晓航  夏一今  李一经 《兽医导刊》2016,(17):67-70

正猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以感染猪发热、厌食,妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎,各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性  相似文献   

猪流行性腹泻病毒中国地方流行株LJ/B03 M基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

范京惠  郎景华  吴凌  张海峰  李一经 《中国兽医杂志》2005,41(7):7-9

从黑龙江某猪场疑似猪流行性腹泻猪的粪便中提取总RNA，采用RT—RCR方法扩增，首次获得中国地方流行株PEDVM全基因序列，将其克隆到pMD18-T载体中进行测序，克隆的M基因核苷酸序列由681个核苷酸组成，含有一个完整的开放阅读框架，编码226个氨基酸。与国外已发表的其他毒株进行基因进化分析，GenBank中的6PEDV形成的基因进化树具有3个分支。其中分离株LJB／03形成一个独立的分支，说明LJB／03的M基因序列与其他毒株相比，发生了一定的变异。  相似文献