猪瘟病毒E0和E2蛋白融合表达的重组腺病毒构建及免疫保护性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨玉艾  初晓辉  毕保良  杨亮宇  吴翱  邱春富  孙永科 《中国预防兽医学报》2010,32(6)

为评价重组腺病毒融合表达猪瘟病毒(CSFV)E0和E2蛋白的免疫保护效果,本研究以CSFV基因组为模板,应用RT-PCR扩增E0和E2蛋白的编码基因,通过pET-32a载体将E0和E2基因串联,形成pET-E0-E2重组质粒。用KpnⅠ和NotⅠ双酶切pET-E0-E2得到E0-E2融合基因,定向亚克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,采用"两步转化法"在细菌内同源重组,构建携带E0-E2基因的重组腺病毒转移载体质粒pAdEasy-E0-E2,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚胎肾细胞(HEK293),成功包装出重组腺病毒(rAd-E0-E2),PCR和western blot检测表明,E0-E2基因已重组于腺病毒基因组中并获得表达。将rAd-E0-E2接种于小鼠和猪,并通过ELISA进行抗体检测。另外,将rAd-E0-E2经肌肉2次(间隔7d)免疫接种6周龄～7周龄猪,3周后用103TCID50CSFV石门株攻毒。结果表明,rAd-E0-E2免疫组6/7头存活,各组织器官带毒时间不超过10d,而非重组腺病毒rAd-CMV免疫组和空白对照组全部死亡,各组织器官均能分离到CSFV。结果提示,rAd-E0-E2能使免疫猪抵抗CSFV强毒攻击,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗提供了实验依据。  相似文献   

云南一株猪瘟流行毒株的分离鉴定     

杨玉艾  杨亮宇  初晓辉  毕保良  吴翱  邱春富  孙永科 《畜牧兽医科技信息》2010,(4)

<正>猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度接触性传染病,其流行广、传染性强、致死率高,所以国际兽疫局将之列为A类传染病。我国从20世纪50年代起广泛应用猪瘟兔化弱毒疫苗预防注射,基本上控制了猪瘟的流行。近年来,猪瘟的流  相似文献