布鲁菌外膜蛋白Bp26在大肠埃希菌中的可溶性表达简     

刘晓颖  姚志利  陈立志  廉士珍  夏小成  冯二凯 《动物医学进展》2014,(1):32-35

  相似文献   

坏死梭杆菌白细胞毒素基因SH片段的克隆与表达     

赵利芳  陈立志  张秀华  冯书章  王克坚  刘晓颖  陆伟  冯凯  王秀东  姚志利 《特产研究》2009,31(1):14-18

坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因（lkt）是其编码基因。以分离到的国内牛源坏死梭杆菌FN（A）菌株F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增白细胞毒素基因SH片段,克隆至pMD18-T载体上,以BamHⅠ和HindⅢ酶切的目的片段SH与相应酶切的pET32a载体连接构建pET32a-SH重组表达质粒,经转化E coli BL21（DE3）后用IPTG进行蛋白诱导,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况。结果表明：扩增基因序列大小为1800bp,SDS-PAGE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2kDa的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经West-ern-blot证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性。  相似文献   

致病性坏死梭杆菌天然白细胞毒素毒性研究     

冯二凯  陈立志  刘晓颖  姚志利  王艳 《吉林农业大学学报》2013,35(4)

为研究坏死梭杆菌白细胞毒素毒性及其致病机理,通过超滤截留技术从细菌培养物上清液分离获得坏死梭杆菌天然白细胞毒素,并通过细胞毒性试验、动物试验以及透射电镜观察等手段对分离获得的白细胞毒素的毒性进行研究.结果表明:坏死梭杆菌白细胞毒素对牛外周血白细胞具有细胞毒性作用,毒素毒性强弱与剂量呈正相关性,高浓度白细胞毒素能裂解白细胞,低浓度白细胞毒素则可诱导细胞凋亡.坏死梭杆菌白细胞毒素一方面能诱导宿主形成坏死病灶,另一方面也能诱导宿主产生对抗坏死梭杆菌感染的免疫保护力.  相似文献   

坏死梭杆菌检测方法研究进展     

姚志利  陈立志  刘晓颖 《动物医学进展》2010,31(5)

坏死梭杆菌是一种严格厌氧的革兰阴性(G-)杆菌,可以依据坏死梭杆菌的菌体形态、菌落特征、生化试验、耐药性试验、酶特性试验等进行检测。根据坏死梭杆菌的16 S rRNA基因序列、16 S～23 SrRNA基因间序列以及rpoB基因序列,可以对其进行菌种水平上的鉴定;根据坏死梭杆菌的gyrB基因序列和白细胞毒素操纵子启动子区序列,可以对坏死梭杆菌进行亚种水平的鉴别。环介导的等温扩增(LAMP)技术的发展也为坏死杆菌病的快速诊断提供了检测方法。  相似文献   

通过双重PCR方法区分坏死梭杆菌亚种     

姚志利  刘晓颖  陈立志  冯凯  王燕  刘振铸  李玉文 《特产研究》2010,32(1):15-18

基于已发表的坏死梭杆菌白细胞毒素启动子区序列,设计3条特异性引物L7、L8和L9。L7和L8分别与Fnn和Fnf的特异性序列结合,L9与两个亚种序列相匹配。分别扩增出1 076bp和809bp的特异性片段。试验结果表明,这些引物具有高度的特异性和敏感性,能够检测坏死梭杆菌基因组DNA的最小量为10pg/μL,建立的双重PCR体系可用于区分坏死梭杆菌亚种。  相似文献