AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究     

汪棋  汪长建  魏宗友  陆汉希  姚晓磊  杨花  王锋  张艳丽 《畜牧兽医学报》2020,51(12):3033-3045

旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin，Met）和阿卡地新（acadesine，AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度（0、100、200、300、400、500 μmol·L^-1）的Met和AICAR，冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度（400 μmol·L^-1 Met、200 μmol·L^-1 AICAR）；然后分别使用不同的冷冻稀释液（对照组：稀释液；Met组：含400 μmol·L^-1 Met的稀释液；AICAR组：含200 μmol·L^-1 AICAR的稀释液）冷冻精液，解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明，稀释液中添加400 μmol·L^-1 Met和200 μmol·L^-1AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05），其中400 μmol·L^-1 Met组精子总活力达43.20%，顶体完整率为91%，质膜完整率为46%。与对照组相比，Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.05）；顶体酶活性显著提高（P<0.05）；丙酮酸水平显著下降（P<0.05），乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高（P<0.05）；与对照组相比，Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05），提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。  相似文献   

绵羊卵巢组织石蜡切片制作条件优化研究     

姜晓龙  陈建伟  姚晓磊  赵妙妙  吕丽华 《上海畜牧兽医通讯》2013,(6):2-3

为观察绵羊正常卵巢组织的形态结构，采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin ，HE）染色法制作绵羊卵巢组织石蜡切片。结果显示，在切片制作过程中存在的问题主要包括染色不均、染色对比不明显、过度染色、染色过浅和切片出现斑点等。在试验过程中可通过充分分化、蓝化、充分水洗等因素的控制来提高切片的染色效果，该方法可为动物卵巢及卵泡染色切片制作提供技术指导。  相似文献   

不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织中Cdc25A基因表达的影响     

关雪  姚晓磊  宋瑞高  王充  纪艳青  李和森  赵丽蓉  石磊 《饲料广角》2015,(1)

通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒对公鸡睾丸组织中细胞周期基因Cdc25A表达的影响,进而为硒调控精子发生周期和生精细胞凋亡的机理提供参考依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0、0.5、1.0和2.0 mg/kg的亚硒酸钠,试验结束时,采集睾丸备用。采用qRT-PCR 检测硒对公鸡睾丸组织中 Cdc25A 基因的表达差异。结果表明,0.5 mg/kg组Cdc25A表达量显著高于其他处理组,且各组之间差异显著（P<0.05）。由此可见,日粮中硒的最适添加量为0.5 mg/kg,此时,Cdc25A mRNA表达量最高,高硒（超过0.5 mg/kg）则会抑制该基因的表达。  相似文献   

日粮中添加不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织细胞结构的影响     

赵辉  姚晓磊  石磊  程彩虹  汤贝贝  李彦霖  张春香  任有蛇 《黑龙江动物繁殖》2013,(2):3-6

通过在日粮中添加亚硒酸钠,研究不同水平无机硒对公鸡睾丸组织细胞结构的影响。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只鸡。对照组饲以基础日粮;硒处理组分别在基础日粮中添加0.5、1和2 mg/kg的亚硒酸钠。H-E染色的结果表明:0.5 mg/kg组公鸡睾丸发育最好,各级生精细胞数量最多;1 mg/kg组睾丸各级生精细胞较多,但细胞间存在明显间隙,成熟精子较少;而2 mg/kg组睾丸组织结构已经发生一定程度的损伤,各级精细胞数量都较少。试验说明,日粮添加适宜浓度的硒可促进公鸡睾丸的发育,而较高的硒添加量会使睾丸发育不良。  相似文献   

绵羊精原干细胞的分离纯化与鉴定     

谢静静  姚晓磊  宋瑞高  吕小康  张瑞鑫  王莉宏  石磊 《黑龙江动物繁殖》2016,(4):12-15

旨在探究一种简便高效的绵羊精原干细胞(SSCs)分离纯化方法,为后续研究SSCs奠定基础。本实验采用两步酶消化法对4月龄的绵羊睾丸进行消化处理,获得单细胞悬液。将睾丸细胞接种于0.2%的明胶预处理培养皿中,根据各细胞贴壁能力和速度的不同将SSCs纯化,并在纯化后用SSCs特异标记分子PLZF进行免疫荧光鉴定。结果表明,经免疫荧光染色得出存在PLZF阳性信号。这说明采用两步酶消化和差异贴壁法可以得到纯度较高的SSCs。  相似文献   

不同日龄犊牛的睾丸组织结构比较观察     

宋瑞高  姚晓磊  吕丽华  刘强  石磊 《黑龙江动物繁殖》2014,(4):12-14

本试验对不同日龄荷斯坦公犊睾丸组织发育情况进行组织学观察。将15、30、60和90日龄的犊牛睾丸制成石蜡切片,并进行H-E染色分析。通过切片观察,得出犊牛的曲精细管生成阶段为60日龄前,此后,曲精细管数量逐步固定,管腔内部的细胞略有增殖,管壁由单细胞层向多细胞层生长,但整体生长比较缓慢。  相似文献   

酵母硒在动物生产中的应用     

姚晓磊  杜亚丽  孙皓然  刘雪雪  石磊 《当代畜牧》2012,(7):34-36

硒是人和动物机体生命活动必需的微量元素之一,它参与机体内蛋白质、氨基酸、脂肪等的营养物质的代谢,同时与提高机体免疫力、抗癌、抗氧化作用等有着密切的联系。酵母硒作为一种优质有机硒源,以吸收率高、生物安全特性高以及环保等优点备受国内外的关注。本文着重从酵母硒在动物生产中提高繁殖性能、生长发育、肉的品质、免疫等方面进行阐述。  相似文献   

精原干细胞研究进展     

宋瑞高  姚晓磊  石磊 《中国养羊》2014,(5):54-57

精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）是各种雄性动物生殖细胞的母细胞,是一群具有自我更新和分化潜能的细胞,并且在雄性个体中精原干细胞与下一代的遗传背景密切相关。因此,精原干细胞在细胞生物学、医学、转基因等领域的研究有着广阔的应用前景。文章根据国内外相关研究进展,对精原干细胞的生物学特性、分离纯化与培养、移植等作一概述。  相似文献   

湖羊PGR基因对卵泡颗粒细胞体外增殖与凋亡的影响     

黄欣爱  王洁  陈明  刘海霞  姚晓磊  李晓丹 《畜牧与兽医》2021,(4):17-23

旨在探究孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因对湖羊卵泡颗粒细胞体外增殖与凋亡的影响。利用RT-PCR技术扩增和克隆获得PGR基因编码序列(CDS),通过生物信息学软件对其氨基酸序列及同源性进行比对;用所获得序列构建过表达载体和干扰siRNA,分别转染湖羊颗粒细胞,并用CCK8技术检测颗粒细胞的细胞活力;采用RT-qPCR和Western blot技术,检测细胞周期和凋亡的相关基因或蛋白表达水平。结果显示,羊PGR基因的CDS区全长2736 bp,编码911个氨基酸;与其他物种氨基酸序列的同源性为39.66%~95.44%。干扰PGR基因通过下调CDK4、Bcl-2和上调Caspas3、Caspase8、BAX基因mRNA的表达(P<0.05),进而抑制颗粒细胞的增殖,但对CyclinD1未产生影响(P>0.05);过表达PGR基因通过上调CDK4、CyclinD1、Bcl-2和下调Caspase3、Caspase8、BAX基因mRNA的表达(P<0.05),进而促进颗粒细胞的增殖;BAX蛋白表达变化与对应mRNA的表达趋势一致(P<0.05);过表达PGR基因显著上调PCNA基因表达,而干扰PGR基因则下调PCNA蛋白表达(P<0.05)。研究表明,PGR基因通过调控细胞周期和凋亡关键基因的表达,影响湖羊颗粒细胞的增殖与凋亡,进而调节湖羊卵泡发育。  相似文献   

山羊睾丸支持细胞的培养与双荧光自噬报告载体的建立     

韩乐  张国敏  杨花  庞静  万永杰  姚晓磊  王锋  张艳丽 《南京农业大学学报》2018,(1)

[目的]本试验旨在建立一个实时追踪山羊细胞自噬发生状况的工具,以探讨细胞自噬对睾丸支持细胞(SC)和生殖细胞的影响。[方法]通过PCR法扩增mCherry-EGFP-LC3基因序列1 884 bp,将其导入真核表达载体pEX-3中,得到重组质粒pmCherry-EGFP-LC3;将pmCherry-EGFP-LC3及对照质粒p EX-3分别转染体外分离培养的山羊SC,饥饿处理12 h后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达,用RT-qPCR和Western blot检测细胞中自噬相关基因和蛋白表达变化,用透射电镜观察细胞自噬体的形成。[结果]成功构建了双荧光自噬报告载体,该载体能在山羊SC中表达,荧光显微镜下可见绿色荧光和红色荧光表达;饥饿处理后,该载体可以指示细胞中自噬泡的形成过程,且细胞自噬相关标记Beclin1 mRNA以及LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA比值和蛋白水平均显著上调,并能观察到初始自噬体的形成。[结论]获得的山羊SC可以作为后续试验的细胞模型;构建的双荧光pmCherry-EGFP-LC3自噬报告载体可为进一步研究山羊SC的自噬发生提供有效的工具。  相似文献