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为确定猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）非结构蛋白2（nonstructural protein 2，Nsp2）与宿主细胞蛋白26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11（PSMD11）之间是否存在相互作用，本研究利用RT-PCR方法扩增猪源PSMD11基因，并构建其真核表达载体pCMV-Myc-PSMD11，经测序和双酶切验证正确后，转染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2），通过Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）检测真核表达载体pCMV-Myc-PSMD11是否能在IPEC-J2中表达。利用免疫共沉淀（Co-IP）试验检测TGEV Nsp2和宿主细胞PSMD11蛋白之间的相互作用，并通过激光共聚焦显微镜观察TGEV Nsp2与PSMD11在宿主细胞中的共定位情况。结果显示，本研究成功扩增了猪源PSMD11基因，大小约为1 474 bp，基因序列经测序比对与标准序列完全一致。构建的真核表达载体pCMV-Myc-PSMD11能在IPEC-J2细胞中成功表达PSMD11蛋白；Co-IP结果表明，PSMD11与Nsp2之间存在相互作用；共定位试验结果显示，PSMD11与Nsp2的相互作用发生在细胞质中，且细胞中PSMD11蛋白的表达位置并未因Nsp2的表达而发生改变。本研究结果为进一步研究TGEV Nsp2在病毒感染过程中所发挥的重要作用提供新的线索。 相似文献
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