鸭肠炎病毒UL18基因的转录、表达特征及原核表达蛋白的初步应用     

陈希文  程安春  汪铭书  常华  陈舜  孙昆峰  朱德康  贾仁勇 《中国兽医学报》2018,(8)

为了探讨鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)UL18基因的特性和功能,本研究运用生物信息学软件对DEV UL18基因及其编码蛋白进行了分析。构建原核表达质粒pET32a-UL18,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得了大小约为55 000的pET32a/DEV-UL18重组蛋白。将该重组蛋白纯化后免疫家兔,获得了兔抗pET32a/DEV-UL18重组蛋白高免血清。采用荧光定量RT-PCR和Western blot对DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后UL18基因的转录和表达情况进行检测,采用间接免疫荧光对DEV感染鸭的肠道和食道进行检测。生物信息学分析结果表明,DEV UL18基因大小969bp,编码1条由322个氨基酸残基组成的多肽,含15个潜在的磷酸化位点和2个N-糖基化位点,含15个潜在的B细胞表位;系统进化树分析表明,DEV UL18属于ɑ-疱疹病毒的1个成员,与MeHV-1亲缘关系最近;密码子偏爱性分析结果表明,若对DEV UL18基因进行外源表达,真核表达系统可能更容易,若选择原核表达系统,则需对宿主表达菌进行选择和条件优化。荧光定量RT-PCR和Western blot结果表明,DEV感染DEF后2h,UL18基因开始转录,感染后12h开始表达,感染24h后转录和表达产物急剧上升,到36和48h后转录和表达产物分别达最大值,之后逐渐下降。间接免疫荧光结果表明,被DEV感染鸭肠道、食道等组织能检测到明显的阳性信号,表明制备的DEV UL18原核表达蛋白及其兔抗多克隆抗体可用于DEV的诊断试剂材料。  相似文献   

动力工程测试技术课程远程在线教学实践     

李小民  孙昆峰  曹侃 《河南农业》2021,(3)

受新冠疫情影响,新学期对动力工程测试技术课程采用了远程在线教学形式。结合在线教学特点和教学计划,对授课内容进行了分块设计,各区块包括授课环节和讨论环节。最终顺利完成了教学计划,学生学习参与度和出勤状况较好。要求学生课前浏览待授知识点并阅读行业规范,利于激发学生学习热情及自学能力提升。在线教学软件还可得到答题讨论状况的定量数据,对探讨适合线下线上混合式教学的教学方法等非常重要。  相似文献