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本研究旨在获得高纯度巴泰病毒(Batai virus,BATV) G1蛋白强抗原性肽段,并建立一种用于检测BATV羊血清抗体的间接ELISA方法。首先对G1蛋白51个氨基酸编码的189-239位氨基酸强抗原肽段进行密码子优化,基因合成后构建重组表达质粒pET-32a-G1189aa-239aa,转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达。优化表达条件获得大量rHis-G1189aa-239aa肽段,利用镍柱亲和层析方法进行纯化,并用BCA试剂盒进行蛋白浓度的测定。通过Western blotting对rHis-G1189aa-239aa肽段进行抗原特异性分析,以rHis-G1189aa-239aa肽段为抗原,羊BATV阳性血清作为抗体,通过方阵滴定优化反应条件,建立BATV间接ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,rHis-G1189aa-239aa肽段在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,分子质量为24.5 ku,在0.1 mmol/L的IPTG诱导5 h后rHis-G1189aa-239aa肽段表达量达到峰值。通过镍柱亲和层析纯化后,测得蛋白浓度为0.296 mg/mL。Western blotting结果显示,rHis-G1189aa-239aa肽段特异性较好。以rHis-G1189aa-239aa肽段为抗原建立的间接ELISA方法,通过条件优化确定最佳抗原包被浓度为2.5 μg/mL,血清和二抗稀释度为1∶60和1∶10 000。样品D450 nm值≥0.367为阳性,D450 nm值≤0.319为阴性。该方法与山羊痘病毒和布鲁氏杆菌的阳性血清均无交叉反应,批内和批间的变异系数均<10%,阳性血清最高可稀释至1 600倍,该方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好的特点。利用本方法对云南地区的120份羊血清样本进行检测,血清阳性率为21.67%。本研究获得了特异性强和纯度较高的rHis-G1189aa-239aa肽段,建立了间接ELISA方法,可应用于羊BATV血清流行病学调查,为疫病防控及致病机制研究奠定基础。 相似文献
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为对比不同ELISA试剂盒评价口蹄疫O型、A型二价灭活苗免疫效果的差异,选取市面上3种不同厂家生产的口蹄疫ELISA检测试剂盒,同时检测3个免疫不同口蹄疫O型、A型二价灭活苗羊场的抗体水平。结果显示:3种试剂盒检测不同场口蹄疫O型抗体合格率均在70%以上,符合率为72.41%~100%;S2试剂盒检测3个场的A型抗体合格率均高于70%,S1和S3试剂盒各有2个场的合格率低于70%,且3种试剂盒符合率较低,为48.28%~68.97%。结果表明,不同ELISA试剂盒评价口蹄疫免疫效果存在一定差异,其中检测A型抗体试剂盒差异显著(P<0.05);3种ELISA试剂盒均可用于口蹄疫O型抗体检测,但并不全适合于A型抗体检测。本试验为相关实验室选择合适试剂盒提供了依据。 相似文献
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为了解云南边境地区马梨形虫病流行情况,2017年1—2月,随机采集红河州泸西县、弥勒市、个旧市、开远市4个地区27个乡(镇)农户饲养的马属动物血样462份,采用ELISA双抗原夹心法检测马梨形虫病抗体。结果显示:共检出4份阳性血样,平均样品阳性率为0.87%;阳性样本分布于弥勒市和个旧市4个乡(镇)年龄为7~13岁的个体中;不同地区、年龄、动物种类之间的阳性率均没有明显差异(P0.05)。调查结果表明,该地存在马梨形虫病病原。这需引起当地重视,尤其在蚊虫活跃季节,更要做好防蜱和灭蜱工作。 相似文献
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免疫学与分子生物学技术在弓形虫病诊断中的研究进展 总被引:2,自引:2,他引:0
弓形虫病是一种呈世界性分布、危害严重的人兽共患寄生原虫病。弓形虫病给养殖业、公共卫生及经济发展带来严重危害。目前在国内还尚未有弓形虫相关疫苗。弓形虫感染的常用诊断方法包括临床诊断、病原学检查和血清学诊断等方法。但由于传统检测方法在特异性、敏感性和早期诊断方面存在一定的缺陷。因此,建立简便、快捷、敏感、特异的弓形虫病的检测方法对于检测弓形虫的感染显得尤为重要。论文主要从免疫学和分子生物学方面对该病的诊断和应用做一简要介绍。 相似文献
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